本申请涉及分子生物学技术领域,具体公开了一种TZAP基因敲除卵巢癌细胞株及其构建方法和应用。所述sgRNA包括sgRNA‑TZAP‑F和sgRNA‑TZAP‑R,所述sgRNA‑TZAP‑F的序列如SEQ ID NO:2所示,所述sgRNA‑TZAP‑R的序列如SEQ ID NO:3所示。本申请基于CRISPR/Cas9技术的TZAP基因敲除方法设计了一段特异的sgRNA识别TZAP基因,最终导致其表达异常。本申请获得的TZAP基因缺失A2780细胞株与正常的A2780细胞株相比能持续促进卵巢癌细胞的增殖,显著提高A2780细胞CFU形成能力及显著促进A2780细胞的迁移能力。