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[发明专利]耐高温的具有纤维素降解能力的芽孢杆菌及其应用-CN201610986741.0有效
发明人：周培;冯海玮;支月娥;聂文翰;张丹;詹学佳;冯洁;初少华 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-11-09 - 公布日： 2020-02-18 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：一种耐高温的纤维素降解的芽孢杆菌及其应用，具体为芽孢杆菌JWT‑1，属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏日期为2016年7月11日，保藏编号CGMCC No.12758。该细菌对秸秆中纤维素、半纤维素、果胶和木质素具有较强的降解能力；并可在60℃的高温下生长繁殖，最高可耐受100℃的高温，具有良好的高温堆肥应用前景。
耐高温具有纤维素降解能力芽孢杆菌及其应用

[发明专利]一种灰略红链霉菌果胶酯酶及其编码基因和应用-CN201610711425.2在审
发明人：周培;支月娥;冯海玮;孙玉静;毛亮;罗艳青;聂文翰 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-08-23 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N9/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种灰略红链霉菌果胶酯酶及其编码基因和应用。该果胶酯酶基因从灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)克隆得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1或其密码子优化后的SEQ ID NO.2所示，上述编码的果胶酯酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO.3，以及该果胶酯酶及其编码基因在降解果胶中的应用。本发明通过对目的蛋白添加可溶性标签和目的蛋白的周外空间表达，保证了蛋白生物活性的同时便于后续蛋白的纯化。该酶是一种碱性、耐高温的果胶水解酶，该酶对多种金属离子及酶活性抑制剂均有很强的耐受能力，因此在实际的生产和应用中具有重要的意义。
一种灰略红链霉菌果胶及其编码基因应用

[发明专利]一种灰略红链霉菌耐高温中性蛋白酶及其编码基因和应用-CN201610711601.2在审
发明人：支月娥;周培;冯海玮;孙玉静;程铭;聂文翰 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-08-23 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明公开了一种灰略红链霉菌耐高温中性蛋白酶及其编码基因和应用。该蛋白酶基因从灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)克隆得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，上述编码的耐高温中性蛋白酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明通过在重组蛋白C端添加聚组氨酸标签(HIS6·Tag)，保证了蛋白活性的同时，也便于蛋白酶的纯化。本发明的蛋白酶具有较宽的适用温度和pH范围，特别是在较高温度55℃下能表现出很好的酶活性；且对多种金属离子及酶活性抑制剂(EDTA、DTT、SDS和NaN3)均有较强的耐受能力。
一种灰略红链霉菌耐高温中性蛋白酶及其编码基因应用

[发明专利]灰略红链霉菌果胶裂解酶编码基因及其外源表达和应用-CN201610729000.4在审
发明人：周培;支月娥;冯海玮;孙玉静;毛亮;聂文翰 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-08-25 - 公布日： 2017-05-10 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开一种克隆自灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)的新型果胶裂解酶编码基因、体外表达方法及其酶学特征。本发明通过将果胶裂解酶基因序列连接到表达载体上，进而得到诱导合成果胶裂解酶的转基因重组大肠杆菌。本发明克服现有技术中由于果胶裂解酶在生物体内酶表达量和活性较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，实现其体外的高效表达。此外，本发明通过添加可溶性聚组氨酸标签，不仅提高了该重组果胶裂解酶的活性和表达量，而且便于表达产物的后续纯化；测定结果表明，该果胶裂解酶是一种碱性、耐高温裂解酶，对多种重金属离子及酶活性抑制剂具有较强的耐受能力。本发明为新型果胶裂解酶制剂的开发与制备奠定了重要的基础。
灰略红链霉菌果胶裂解编码基因及其表达应用

[发明专利]生物发酵一体化有机肥制备方法-CN201610256609.4在审
发明人：周培;冯海玮;支月娥;聂文翰;张丹;詹学佳;冯洁;初少华 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2016-04-25 - 公布日： 2016-09-07 - 主分类号： C05G1/00 文献下载
摘要：一种生物发酵一体化有机肥制备方法，通过将用于秸秆降解的复合菌剂预发酵后添加入堆肥，通过有氧发酵的方式实现有机肥制备；该复合菌剂，由作为载体的麦麸和复合菌组成，其中菌液的成分为：复合菌Ⅰ、复合菌Ⅱ、复合菌Ⅲ、辅助复合菌以及水。本发明全程高通氧，保证生物发酵的好氧环境；发酵添加的菌种均为抗逆性能力较强的微生物，在常温条件下具有较长的活性周期，为连续发酵的开展提供了重要的理论基础；采用可明显缩短秸秆降解发酵周期，使发酵周期缩短至10天内。因此，本发明能够最大程度的提高有机肥的生产速度，缩减生产成本，为秸秆生物有机肥的发酵生产奠定了基础。
生物发酵一体化有机肥制备方法

[发明专利]基于秸秆废弃物的微生物及其肥料发酵制备方法-CN201510449534.7在审
发明人：支月娥;蒋静彦;冯海玮;周培;张丹;初少华;毛亮 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2015-07-28 - 公布日： 2015-11-04 - 主分类号： C05G3/00 文献下载
摘要：一种基于秸秆废弃物的微生物及其肥料发酵制备方法，通过EM与JFB‐2菌种组成的混合菌种进行预发酵和秸秆原料预处理，再以改良方式进行通风，从而实现发酵。本发明能够实现快速、高效生产品质优良的秸秆有机肥，减缓化肥造成的面源污染，使用田园分布式农业废弃物清洁化收集系统即移动式秸秆高通氧生物发酵系统，解决农业造成的环境污染，将废弃物变成宝贵的生物资源。
基于秸秆废弃物微生物及其肥料发酵制备方法

[发明专利]基于谷氨酸脱氢酶的工程菌及其实现方法-CN201410705878.5在审
发明人：周培;冯海玮;王大欣;俞明磊;毛亮;唐冬 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-11-27 - 公布日： 2015-04-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)胞内谷氨酸脱氢酶编码基因及其应用。通过将该谷氨酸脱氢酶编码基因构建到表达载体上，并将该重组表达载体导入大肠杆菌进而得到可发酵合成谷氨酸脱氢酶的转基因重组大肠杆菌。本发明克服现有技术中由于谷氨酸脱氢酶多为胞内表达且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成。此外，本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法，方便了后期蛋白的纯化。本发明可为谷氨酸脱氢酶的规模化发酵生产提供一种新方法。
基于谷氨酸脱氢酶工程及其实现方法

[发明专利]耐高温链霉菌在农业废弃物堆肥中的应用-CN201410558208.5在审
发明人：周培;冯海玮;毛亮;支月娥;孙玉静;罗艳青 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-10-20 - 公布日： 2015-02-18 - 主分类号： C05F11/08 文献下载
摘要：一株可高效降解和转化水稻秸秆和猪粪氮素的耐高温放线菌。本发明所述的放线菌属于灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)，保藏编号为CGMCC No.5706。该菌不仅对水稻秸秆中的木质纤维素有很强的降解能力，还可以快速转化猪粪中的硝态氮和有机氮；该菌株可耐受70℃以上的高温，通过在水稻秸秆和猪粪的混合堆肥中添加该菌，可以显著提高堆肥温度，缩短发酵周期，提高有机肥的质量与产量；此外，接种该固体菌剂后所得有机肥可快速培肥土壤，提高有机肥、全氮、硝态氮及铵态氮含量，活跃土壤酶活性，最终实现作物增产。
耐高温霉菌农业废弃物堆肥中的应用

[发明专利]基于外切葡聚糖酶的工程菌及其实现方法-CN201410462541.6在审
发明人：周培;冯海玮;支月娥;孙玉静;罗艳青 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基因工程领域的基于外切葡聚糖酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和谷胱甘肽标签的引物进行PCR扩增得到编码外切葡聚糖酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得外切葡聚糖酶过表达重组菌株。本发明通过构建外源表达载体，优化蛋白诱导表达的条件和融合标签等方法，实现了外切葡聚糖酶的胞外过表达。
基于外切聚糖工程及其实现方法

[发明专利]基于木质素过氧化物酶的工程菌及其实现方法-CN201410462409.5在审
发明人：周培;冯海玮;支月娥;孙玉静 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基因工程领域的基于木质素过氧化物酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和谷胱甘肽标签的引物进行PCR扩增得到编码木质素过氧化物酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得木质素过氧化物酶过表达重组菌株。本发明通过构建外源表达载体，优化蛋白诱导表达的条件和融合标签等方法，实现了木质素过氧化物酶的胞外过表达。
基于木质素过氧化物工程及其实现方法

[发明专利]基于胞外漆酶的工程菌及其实现方法-CN201410462414.6在审
发明人：周培;冯海玮;孙玉静;支月娥 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基因工程领域的胞外漆酶的工程菌，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物进行PCR扩增得到编码胞外漆酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得胞外漆酶过表达重组菌株。本发明针对现有技术存在的由于胞外漆酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在表达重组蛋白N端添加聚组氨酸标签的方法，提高蛋白活性的同时也保证了纯化后胞外漆酶的纯度；此外，本发明通过载体信号肽实现了目的蛋白的周质空间表达，提高了胞外漆酶的活性。
基于胞外漆酶工程及其实现方法

[发明专利]基于木糖苷酶的工程菌及其实现方法-CN201410462373.0在审
发明人：周培;冯海玮;孙玉静;支月娥;罗艳青 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基因工程领域的木糖苷酶的工程菌，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物进行PCR扩增得到编码木糖苷酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得木糖苷酶过表达重组菌株。本发明针对现有技术存在的由于木糖苷酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在表达重组蛋白C端添加聚组氨酸标签的方法，提高蛋白活性的同时也保证了纯化后木糖苷酶的纯度；此外，本发明通过载体信号肽实现了目的蛋白的周质空间表达，提高了木糖苷酶的活性。
基于糖苷酶工程及其实现方法

[发明专利]基于锰过氧化物酶的工程菌及其实现方法-CN201410462406.1在审
发明人：周培;冯海玮;孙玉静;支月娥 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基因工程领域的基于锰过氧化物酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物进行PCR扩增得到编码锰过氧化物酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得锰过氧化物酶过表达重组菌株。本发明针对现有技术存在的由于锰过氧化物酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在表达重组蛋白C端添加聚组氨酸标签的方法，提高蛋白活性的同时也保证了纯化后锰过氧化物酶的纯度；此外，本发明通过载体信号肽实现了目的蛋白的周质空间表达，提高了锰过氧化物酶的活性。
基于过氧化物工程及其实现方法

[发明专利]基于纤维素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法-CN201410374224.9在审
发明人：周培;冯海玮;孙玉静;支月娥;罗艳青 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-07-31 - 公布日： 2014-12-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基于纤维素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA经过全基因合成构建得到载体为模板，分别与对应含有酶切位点的引物进行PCR扩增并对应分别得到编码外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列、编码内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶的核苷酸序列和编码β‐1,4‐葡萄糖苷酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的序列依次连接到共表达载体，最终得到重组共表达载体和重组表达载体；之后将重组共表达载体先后转化到大肠杆菌表达菌株内，获得转基因共表达菌株。本发明应用基因工程手段实现外切‐β‐1,4‐葡聚糖酶、内切‐β‐1,4‐葡聚糖酶和β‐1,4‐葡萄糖苷酶体外的大量表达合成，最终实现纤维素的原位快速降解。
基于纤维素代谢通路关键工程及其实现方法

[发明专利]基于木质素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法-CN201410374644.7在审
发明人：周培;冯海玮;孙玉静;支月娥;罗艳青 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-07-31 - 公布日： 2014-11-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种基于木质素代谢通路关键酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA经过全基因合成构建得到载体为模板，分别与对应含有酶切位点的引物进行PCR扩增并对应分别得到编码漆酶的核苷酸序列、编码木质素过氧化物酶的核苷酸序列和编码锰过氧化物酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的序列依次连接到共表达载体、将扩增得到的序列连接到重组表达载体，最终得到重组共表达载体和重组表达载体；之后将重组共表达载体与重组表达载体先后转化到大肠杆菌表达菌株内，获得转基因共表达菌株。本发明能够应用基因工程手段实现漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶体外的大量表达合成，最终应用于实现木质素的原位快速降解。
基于木质素代谢通路关键工程及其实现方法

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