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[发明专利]带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法-CN202311205212.9在审
发明人：李凡;何鹏;兰平秀;谭冠林;陈小姣;罗恒明 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2023-09-19 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明涉及一种带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法，属于植物病毒学和基因工程领域。本发明中带GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体，是利用酵母重组的方法，将PMNV全基因组RNA对应的cDNA全长序列克隆至pCB301‑HDV‑2µ载体的双35S启动子和终止子NOS之间，并把绿色荧光蛋白报告基因插入到PMNV的NIb蛋白和CP蛋白之间，即获得pCB301‑PMNV‑GFP重组载体。本发明利用酵母同源重组技术构建的PMNV侵染性克隆载体是重楼上植物病毒的第一个侵染性克隆，本发明中构建的pCB301‑PMNV‑GFP载体能稳定高效系统侵染模式植物本生烟，并在本生烟体内高效表达GFP。
带有 gfp 基因重楼花叶坏死病毒侵染克隆载体及其构建方法

[发明专利]PEMV-1、BYMV、BrYV一步法多重RT-PCR检测试剂盒及检测方法-CN202311042146.8在审
发明人：蔡红;余淑婷;李凡;兰平秀;陈小姣;谭冠林 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2023-08-18 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明目的在于提供一种PEMV‑1、BYMV、BrYV一步法多重RT‑PCR检测引物组、试剂盒及方法，涉及病毒检测技术领域，本发明可同时检测PEMV‑1、BYMV、BrYV三种病毒。具体包括：提取待测样品总核酸作为模板，采用针对PEMV‑1、BYMV、BrYV三种病毒的特异性检测引物，一步法多重RT‑PCR技术扩增目的片段，可高效、快速、灵敏地检测出样品中的PEMV‑1、BYMV、BrYV。本发明具有操作简单高效、节省时间、节约成本、稳定性高等优点，为PEMV‑1、BYMV、BrYV的快速检测和防治提供技术支持。
pemv bymv bryv 一步法多重 rt pcr 检测试剂盒方法

[发明专利]一种PEMV-1和PEMV-2的RT-PCR同步检测试剂盒及检测方法-CN202211241715.7在审
发明人：李凡;龙昌芳;兰平秀;陈小姣;谭冠林 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2022-10-11 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明申请是关于一种PEMV‑1和PEMV‑2的RT‑PCR同步检测试剂盒及检测方法，基于一步法多重RT‑PCR检测方法，属于植物保护领域。本发明通过设计PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的特异性检测引物，并采用CTAB法提取染病样品总核酸作为模板，利用一步法多重RT‑PCR技术实现对PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的同步检测。通过对反应体系和反应条件的优化，该方法可以高效、快速、准确地实现对PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的特异性检测，较传统RT‑PCR检测方法一次只能检测单一病毒更具高效性，且显著降低了检测成本，极大地节约了检测时间。
一种 pemv rt pcr 同步检测试剂盒方法

[发明专利]基于PEMV-1和PEMV-2侵染性克隆高效筛选抗病毒种质资源的方法-CN202211567418.1在审
发明人：陈小姣;陈泓霖;谢敏;兰平秀;谭冠林;李凡 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于PEMV‑1和PEMV‑2侵染性克隆高效筛选抗病毒种质资源的方法；包括：农杆菌浸根步骤。本发明具有以下优点：1、本发明方法操作简便，具有比人工摩擦接种更省时、更方便的优点；2、本发明方法可以通过调节侵染性克隆的浓度来控制病毒的接种量，同一批次的不同植株之间接种量误差小；3、本发明方法中一种侵染性克隆只具有一种病毒的侵染活性，解决了毒源不纯的问题，满足了要求特定病原接种的实验条件；4、本发明方法接种效果好，对植株的侵染率高；5、本发明方法使植株获毒时间早，病毒在植株体内积累的时间长；6、本发明方法成本相对较低，接种操作时间短。
基于 pemv 侵染克隆高效筛选抗病毒种质资源方法

[发明专利]一种同步检测ZYMV、PRSV和ZTMV的方法-CN202010294114.7有效
发明人：李凡;柳勤海;肖龙;谭冠林;陈小姣;兰平秀 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2020-04-15 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种同步检测ZYMV、PRSV和ZTMV的方法，属于植物保护领域，本发明通过设计ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒的特异性检测引物，并采用CTAB法提取感病样品总核酸作为模板，利用一步法多重RT‑PCR技术实现同时检测ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒。通过反应体系与反应条件的优化，该方法可以高效、准确实现对ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒的特异性检测，较传统RT‑PCR检测过程中只能检测单一病毒具有更高的效率，降低了检测成本，又可以保证检测结果的准确性，在上述3种病毒病检测中具有广阔的应用前景。
一种同步检测 zymv prsv ztmv 方法

[发明专利]一种同步检测PnVY和TYLCCNV的方法-CN201911262660.6在审
发明人：李凡;杨馨;柳勤海;谭冠林;兰平秀;陈小姣 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2019-12-11 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，属于植物保护领域，本发明涉及到的两种病毒的核酸类型不同，设计合成检测PnVY和TYLCCNV的引物，并筛选适用于两种病毒复合侵染的特异性引物；用CTAB法提取染病植物组织的总核酸，既能保证所提核酸中有DNA和RNA，也能降低检测成本；优化一步法双重检测体系，达到对PnVY和TYLCCNV的同步快速检测。该方法整个检测过程所用时间短，减少了试剂污染和反应中的影响因素，能够有效单一或复合识别PnVY、TYLCCNV，保证了检测结果的准确性。
一种同步检测 pnvy tylccnv 方法

[发明专利]一种同步检测SPVG、SPLV和SPMMV的方法-CN201710182795.6有效
发明人： 兰平秀;李如慧;李凡;李月月;谭冠林;马向丽;陈小姣;马龑;谭松涛;熊锋;何英云 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2017-03-24 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种同步检测SPVG、SPLV和SPMMV的方法，属于植物保护领域；通过分别设计合成SPVG、SPLV和SPMMV的正向引物、反向引物和探针，建立同时检测三种病毒的实时荧光多重RT‑PCR方法，检测植物细胞色素氧化酶基因（COX）的引物和探针被作为内参纳入实时荧光多重RT‑PCR的体系构建，避免因模板核酸质量差导致的假阴性结果。本发明对SPVG的检测灵敏度达到10
一种同步检测 spvg splv spmmv 方法

[发明专利]一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法-CN201611174200.4有效
发明人：李凡;李月月;谭冠林;肖龙;马龑;熊锋;兰平秀;陈小姣;何英云;谭松涛 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2016-12-19 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法；所述的烟草花叶病毒属病毒通用检测引物对序列为：正向引物TobamodF：5’‑TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG‑3’，反向引物TobamodR：5’‑ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT‑3’；本发明中的检测引物是基于烟草花叶病毒属中的32种病毒基因组保守区序列进行设计，用该属中的7种病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好；从而建立了一种能够检测至少7种烟草花叶病毒属病毒的通用检测引物及方法，且具有检测效率高、灵敏度高、成本低的特点。
烟草花叶病毒通用检测引物病毒扩增效果保守区序列病毒基因组分子生物学反向引物检测引物正向引物对引物灵敏度检测验证

[实用新型]一种饲喂刺吸式口器昆虫研究植物虫传病毒的轻便装置-CN201820470684.5有效
发明人：李凡;马龑;兰平秀;李月月;陈海如;谭松涛;刘琴丽;孟鈺 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2018-04-04 - 公布日： 2018-11-02 - 主分类号： A01K67/033 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种饲喂刺吸式口器昆虫研究植物虫传病毒的轻便装置，属于植物保护专业技术领域，所述饲喂刺吸式口器昆虫研究植物虫传病毒的轻便装置包括环形发泡聚乙烯骨架、防虫网布、U型卡扣，骨架的两圆形侧面缝有防虫网布，骨架取侧立面以半圆的范围进行开口均分为两个开口半圆，两个开口半圆内分别穿入弹簧钢丝作为结构支撑，U型卡扣分为a边和b边，a边固定连接至骨架其中一个开口半圆，b边扣在骨架另一个开口半圆上。本实用新型轻便易用，可以在研究刺吸式口器昆虫传播植物虫传病毒的过程中既提供一个密闭小型网箱来饥饿昆虫，又能直接夹在植物叶片上面限位进行昆虫的获毒和传毒。
刺吸式口器昆虫虫传病毒开口半圆轻便研究植物饲喂本实用新型防虫网昆虫专业技术领域植物保护发泡聚乙烯弹簧钢丝结构支撑小型网箱圆形侧面植物叶片半圆侧立面密闭边扣穿入限位饥饿开口传播研究

[发明专利]同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法-CN201210492173.0无效
发明人：李凡;刘芳;陈海如;谭冠林;兰平秀;王海宁;李晓静;朱静;吴德喜;蔡红 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2012-11-28 - 公布日： 2013-03-06 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法，属植物保护领域。通过分别设计合成TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA正反向引物，CTAB法提取染病植物组织或传毒介体昆虫总RNA，采用一步法四重RT-PCR，达到对这4种病原物的同步快速检测。所设计的引物特异性强，能同时扩增出4种病原物。用CTAB法提取染病植物组织及传毒介体昆虫的总RNA，既能保证所提RNA的质量，也能降低检测成本。反转录与多重PCR一步完成，极大地节约了检测时间。本发明具有快速、高效、特异性强、灵敏度高和成本低廉等优点，能一次实现对与烟草丛顶病相关的4种病原物的同步检测，具有广阔的应用前景。
同步检测 tbtv tvdv sat tvdvarna 方法

[发明专利]烟草扭脉病毒检测方法-CN200510048736.7无效
发明人：李凡;王钰丽;陈海如;孙健;蔡红;吴建宇;秦西云;孔宝华;兰平秀;杨金广 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2005-12-22 - 公布日： 2006-09-06 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种烟草扭脉病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草扭脉病毒核苷酸序列设计的特异性引物TVCPF/TVCPR，提取植株组织的总RNA后，采用RT－PCR的方法，检测烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术和总核酸提取法的缺点，方便、特异、灵敏的检测烟草扭脉病毒。
烟草病毒检测方法

[发明专利]同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒的方法-CN200510048727.8无效
发明人：李凡;王钰丽;陈海如;蔡红;孙健;吴建宇;吴德喜;秦西云;杨根华;程建勇;马琨玲;钱宁刚;兰平秀;杨金广 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2005-12-22 - 公布日： 2006-06-28 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明提供一种同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒的方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒核苷酸序列分别设计两对特异性引物TB2F/TB2R(检测烟草丛顶病毒)及TVCPF/TVCPR(检测烟草扭脉病毒)。提取植株组织的总RNA后，采用双重RT－PCR的方法，同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术以及总核酸提取法和传统RT－PCR方法的缺点，只用相当于一次普通RT－PCR的时间和试剂，就可以方便、特异、灵敏的同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。
同步检测烟草病毒方法

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