本发明提供了一种PRRSV、PCV2、PRV和CSFV的多重PCR检测试剂盒,包括反转录体系、2×NanoPCR Mix和引物组合物,所述反转录体系为5×反转录缓冲液、dNTP Mixture、反转录酶、RNA酶抑制剂和反转录引物,所述的引物组合物为SEQ ID NO.1~8。该试剂盒可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪瘟病毒。本发明还提供了一种采用前述试剂盒进行四种病毒检测的方法,能够快速、特异的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪瘟病毒,大大提高了四种病毒的检测效率。