[发明专利]裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用

说明书

本发明是将裸花紫珠作为鱼类疫苗的佐剂，其有效成分为裸花紫珠，该佐剂的应用可以提高疫苗接种后的特异性保护率，该佐剂使用方式是与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗混合后注射使用。将裸花紫珠作为一种鱼类疫苗佐剂，其优点在于价格低廉、残留低，不会使鱼获得耐药性、抗药性等。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用。

背景技术

近年来，随着我国水产养殖业规模化和集约化程度的提升，病害已成为制约水产养殖业持续健康发展的重要因素。其中，迟缓型爱德华氏菌所引起的细菌性疾病对青鱼、草鱼等鲤科鱼类的健康养殖造成了巨大威胁。迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)属于肠杆菌科爱德华菌属，属革兰氏阴性菌，已被中国农业农村部列为三类动物疫病，其易感动物包括鱼类、贝类、哺乳类、爬行类等。鱼类主要通过摄食带有迟缓爱德华氏菌的饵料，或接触带有迟缓爱德华氏菌的鱼类而受到感染。Edwardsiella tarda通过鱼类的消化道、鳃或者受伤表皮侵入鱼体，给我国水产养殖业造成了巨大的经济损失。

鱼类虽然是最低等的脊椎动物，但它同时拥有先天免疫系统和适应性免疫系统。早在1938年，Snieszko等就发表了使用点状气单胞菌免疫鲤鱼后可获得免疫保护力的相关文献；1939年及1942年，Duff的研究发现通过注射和口服免疫，鳟鱼可获得杀鲑气单胞菌的免疫保护；在随后的“二战”时期，由于抗菌药物的广泛使用，使得水产养殖业进入了“药物时代”。但随着病原抗药性、耐药性等问题的出现，不仅导致水产养殖业巨大的经济损失，而且影响水产品质量并造成生态环境污染，这让人们重燃起对鱼类疫苗的兴趣。至20世纪70年代，鱼类疫苗在商业化的水产养殖业中开始得到应用。

鱼类疫苗根据其能否复制，可分为非复制型及复制型疫苗。其中非复制型疫苗包含灭活疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗及颗粒疫苗，这些疫苗可通过紫外线、高温及声波等物理方法灭活，也可通过使用化学试剂如甲醛或通过低PH、溶剂、洗涤剂等化学方法灭活。复制型疫苗主要包括减毒活疫苗，它可通过实验室传代、环境菌替代、物理或化学诱变、基因工程技术及活菌表达抗原等方式达到减毒的效果。

鱼类疫苗主要通过三种方式进行接种：腹腔或肌肉注射、浸泡(浸浴或喷洒)及饲喂含疫苗饲料的经口免疫。这三种接种方式有各自的优缺点：(1)注射免疫能引起最佳的免疫保护，但对接种设备要求高、不适合鱼苗或小鱼种、耗费劳动力；(2)浸浴操作方便，不需要将鱼从养殖池转运出来，不会对鱼造成损伤，但其缺点是只适合鱼苗或幼鱼，成鱼或数量巨大的鱼如果用浸浴免疫会导致成本过高；(3)口服免疫适用于数量巨大、不易处理或易应激的鱼类，其缺点是保护效果差、疫苗消耗过大。

迄今为止，疫苗接种是预防水产养殖业传染性疾病最有效的方法。然而仅使用疫苗并不能起到很好的免疫保护效果，因此，通常会加入佐剂来提高疫苗的免疫效力。传统佐剂(如矿物油)被广泛应用于鱼类细菌疫苗，但这类佐剂不易注射，会引起较强的组织炎性反应，产生明显的副作用，且对细胞内病原疫苗作用不明显。随着鱼类免疫学的深入研究，纳米粒子、β-葡聚糖、细胞因子及中草药成分也作为佐剂应用于鱼类疫苗。如将黄茋多糖和蒲公英多糖作为哈维氏弧菌灭活疫苗的佐剂，可以明显提高该疫苗对牙鲆的免疫保护率。

裸花紫珠是一种分布于中国海南、广东、广西的中草药，属马鞭草科的灌木或小乔木。其叶有止血止痛、散瘀消肿之药用，亦可用于血热毒盛所导致的呼吸道、消化道出血及细菌感染性炎症，裸花紫珠还具有治疗肝硬化消化道出血、慢性盆腔炎、细菌性肺炎等临床药效。研究人员通过色谱法分离纯化，发现裸花紫珠化学成分主要包括6个黄铜和3个苯乙醇苷。目前，未有将裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂的相关报道。

发明内容

为了解决现有技术中上述问题，本发明提供了裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用。

为了达到上述目的，本发明的实施例提供了裸花紫珠在制备增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂中的应用。

进一步的，所述鱼类疫苗的抗原为细菌。