[发明专利]近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物荧光传感技术领域，具体为近红外第二窗口检测pH双通道比率荧光传感器及其制备方法和应用。本发明荧光传感器涉及染料包括：一具有近红外第二窗口发射的氮杂氟硼二吡咯类近红外荧光染料NAB和pH响应近红外罗丹明类荧光染料NRh；此两染料以不同摩尔比通过甲氧基聚乙二醇磷脂包裹构建可调检测转换点的近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器pTAS；该传感器可用于对小鼠体内pH的变化可视化检测。

技术领域

本发明属于生物材料技术领域，具体涉及近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器及其制备方法和应用。

背景技术

目前常见的分子影像技术如X线断层扫描成像(X-CT)，超声成像(UI)，正电子放射性断层成像(PET)和磁共振成像(MRI)已广泛用于对疾病等的医疗诊断。但是目前这些影像技术有其自身的缺点，如辐射，较差的空间分辨率，无法实现动态实时监测等。荧光成像由于实时、非侵入性、分辨率高、所需样品量少等优点，在生物技术领域等领域被广泛应用，尤其是有生物组织的荧光成像。相对于近红外第一窗口(700nm～900nm)荧光成像受限于生物组织在此波段范围内有很强的吸收和散射致使其信噪比和组织穿透深度都比较低，近红外第二窗口(900nm～1700nm)荧光成像，由于在这个波段内生物组织自身的吸收和散射弱，成像质量高和穿透深度深，成为近期荧光成像领域研究热点之一。目前，一些无机材料如碳纳米管，稀土下转换纳米颗粒，量子点实现近红外第二窗口区的发射，但是含有重金属元素具有潜在的生物毒性，进入活体后代谢缓慢，且在水中溶解性差，这大大限制了它们的应用价值。相对于无机材料，有机染料具有相对分子量较小，易于代谢，同时也可以实现近红外第二窗口区的发射，利于临床转化。所以近红外第二窗口区的有机荧光染料引起了广泛的关注。

近期，很多课题组开发了具有近红外第二窗口发射的有机小分子荧光染料，并应用于生物活体成像。这些染料大部分都属于荧光始终开启状态，在通过静脉给入生物体后，不管是否到达靶向组织，都会持续发出荧光信号，造成背景信号很高，导致靶标与背景信号比小的荧光成像，进而限制荧光检测的灵敏度和特异性；另外，也有一些报道基于靶向目标激活的单通道成像荧光探针，此种探针基于单一通道荧光增强模式成像，经常受限于激发光源与生物组织环境从而影响荧光检测的精准度。因此，开发近红外第二窗口检测的双通道比率荧光传感器，实现成像检测诊断的灵敏度、特异性和精准度，成为推进近红外第二窗口技术诊断检测与临床应用亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备工艺简单、生物相容性好、检测灵敏度高、精确度高的具有可调检测转换点的近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器及其制备方法和应用。

本发明提供的近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器，采用氮杂氟硼二吡咯染料(记为NAB)和pH响应的近红外罗丹明类荧光染料(记为NRh)，两染料通过甲氧基聚乙二醇磷脂包裹构建荧光传感器，记为pTAS；其通过染料间的能量共振转移(FRET)，实现双通道比率荧光检测，并通过简单的对NAB与NRh的摩尔比调控实现检测点转换的调节，以满足检测对象不同亚区间的成像需要。

第一，本发明主要是在前人工作的基础上设计制备近红外第二窗口发射新的氮杂氟硼二吡咯和pH响应罗丹明类荧光染料，以此构建双通道比率荧光传感器，通过简单的对两种染料的摩尔比调控实现检测点的转换的调节，该设计思路和化合物结构未见文献报道。

第二，本发明针对现有近红外第二窗口成像的“始终开启”染料和单通道荧光激活探针带来成像检测灵敏度、特异性和精准度差等问题，合成并构建近红外第二窗口检测pH的双通道比率荧光传感器。该传感器实现了对小鼠病灶微环境pH的酸性变化和碱性变化过程进行精准可视化监测。

本发明首先提供一种近红外第二窗口发射的有机小分子荧光染料NAB和pH响应染料NRh，其化合物结构式如下：

本发明还提供上述两个化合物的制备方法，其中，有机小分子荧光染料NAB的合成路线为：