[发明专利]一种具有脑靶向功能的雷公藤甲素和小檗碱共载纳米脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括：

以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL-COOH；

利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL-COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15-25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR-PL和BR-PL-COOH脂质体；

在BR-PL和BR-PL-COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液，在40-60℃恒温孵育至少60min，冰水浴终止载药，制得雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体TP-BR-PL和TP-BR-PL-COOH。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL-COOH，包括：

按照HSPC/CH比为2-4：1，mPEG₂₀₀₀-DSPE/DSPE-PEG₂₀₀₀-COOH比为1：1.5-2.5混合，加入乙醇，在50-75摄氏度下水浴加热，挥干乙醇，加入预热至相同温度的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，水浴搅拌得空白脂质体初品；

以超声波细胞粉碎机处理空白脂质体初品，并依次通过0.8μm、0.45μm、0.22μm微孔滤膜进行整粒，分别制得PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL-COOH。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL-COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15-25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR-PL和BR-PL-COOH脂质体，包括：

将磷酸钠溶液与羧基端空白脂质体PL-COOH混悬液混合，并调节外水相pH为7；

取梯度空白脂质体PL，按药脂比1：15-25加入盐酸小檗碱BR溶液，在45-60℃恒温孵育至少15min，冰水浴终止载药得BR-PL和BR-PL-COOH脂质体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在BR-PL-COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液进行载药时，载药温度为55摄氏度；载药时间为15min，药脂比为l：20。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括：将TP-BR-PL-COOH过葡聚糖凝胶Sephadex G-100微柱除去未包封的游离药物，在冰水浴条件下，向其中加入EDC水溶液和NHS水溶液，磁力搅拌活化至少0.5h至室温后加入脑靶向配体Lf，加入TEA，反应至少4h后终止反应，得到脑靶向雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体TP-BR-Lf。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，按照HSPC/CH比为3：1，mPEG₂₀₀₀-DSPE/DSPE-PEG₂₀₀₀-COOH比为1：2混合。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括：梯度空白脂质体PL的制备方法包括：

以(阴阳离子交换纤维柱除盐建立梯度，得最终磷脂浓度约为20mg/mL的具有(NH4)₂SO₄跨膜离子梯度的空白脂质体PL混悬液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括，采用Y迷宫实验测定TP-BR-Lf对AD模型小鼠行为学能力影响的测定：

侧脑室注射Aβ_1-42建立AD小鼠模型；

将小鼠放入A臂末端，可自由出入A、B、C三个臂，记录小鼠5min内进入三个臂的总次数N及进臂顺序，以连续进入三个不同的臂为一次正确交替反应，记录正确交替反应次数N_s，其中，迷宫实验装置由三个夹角为120°的支臂组成，分别为A、B、C三臂；

用自发交替反应率alternation behavior％反映小鼠空间工作记忆能力，则Alternation behavior(％)＝N_s/(N-2)×100％。