[发明专利]一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法

说明书

本发明公开了一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法，包括以下步骤：S1：将PDA培养基培养5d的尖孢镰刀菌，打成菌饼；S2：取10块菌饼接种于灭菌的PDB培养基中，每瓶150mL，28℃，180r/min振荡培养24h；S3：使用3层纱布过滤菌丝制成尖孢镰刀菌的发酵液，分装至2mL离心管中，将发酵液常温下，12000r/min离心10min，弃上清液；S4：向每个离心管中添加2mL的无菌水，将所有2mL离心管中混合液汇集到三角瓶内。优点在于：只需在1个PDA培养基培养5d后的尖孢镰刀菌上打10个9mm的菌饼，接入PDB中，振荡培养使尖孢镰刀菌在PDB中大量繁殖，此方法不仅解决了孢子悬浮液制备量少的问题，而且省时省力，同时也减少了需要培养尖孢镰刀菌的数量，节约培养基的使用量。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是指一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法。

背景技术

通常制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法是：将尖孢镰刀菌接种至PDA培养基，25℃培养5d，向尖孢镰刀菌表面加入5mL无菌水，轻轻将菌丝刮下，通过2层纱布过滤至试管中，混匀，最后用血球计数板测定孢子浓度。该方法是目前多数实验室所使用的制备方法，操作简单，但通常情况下每个90mm的培养皿只能制备出3～5mL左右浓度在1×10⁶～2×10⁶CFU·mL^-1的孢子悬浮液(体积过大浓度则过低，无法满足试验需求)，因此需要制备大量孢子悬浮液来进行试验的话就需要培养大量的尖孢镰刀菌，同时进行大量的上述操作，使工作量加大。

鉴于以上，我们提出一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法来解决上述问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题就是克服以上的技术缺陷，提供一种结构简单，实用性强，使用效果好的一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法，包括以下步骤：

S1：将PDA培养基培养4-7d的尖孢镰刀菌用9mm打孔器打成菌饼；

S2：取10块菌饼接种于灭菌的PDB培养基中，每瓶150mL，26-30℃，180r/min振荡培养24h；

S3：使用3层纱布过滤菌丝制成尖孢镰刀菌的发酵液，分装至2mL离心管中，将发酵液常温下，10000-14000r/min离心10min，弃上清液；

S4：向每个离心管中添加1-2mL的无菌水(根据离心后的沉淀量适当添加无菌水)，振荡混匀后，将所有2mL离心管中混合液汇集到三角瓶内，完成尖孢镰刀菌孢子悬浮液的制备。

进一步的，再通过血球计数板镜检孢子数量，确定该孢子悬浮液浓度，如未达到所需试验浓度，可再按此方法制备添加至原有孢子悬浮液；如超过所需试验浓度，可添加适量无菌水进行稀释处理。

本发明与现有技术相比的优点在于：基于以上方法存在的缺点与不足问题，构思出一种新型制备尖孢镰刀菌孢子悬浮液的方法，只需在1个PDA培养基培养5d后的尖孢镰刀菌上打10个9mm的菌饼，接入PDB中，振荡培养使尖孢镰刀菌在PDB中大量繁殖，1d后即可对所得液体进行过滤、离心，添加适量无菌水制备出大量的孢子悬浮液，每瓶PDB能制备出100～120mL浓度在1×10⁶～2×10⁶CFU·mL^-1。此方法不仅解决了孢子悬浮液制备量少的问题，而且省时省力，同时也减少了需要培养尖孢镰刀菌的数量，节约培养基的使用量。

具体实施方式

下面进一步说明本发明的具体实施方式。