[发明专利]从猪皮中获取去端肽胶原蛋白的制备方法及胶原蛋白

说明书

本申请公开一种从猪皮中获取去端肽胶原蛋白的制备方法及胶原蛋白，制备方法以三月龄SPF猪皮为原料，用脱脂剂脱脂后，采用酶解法提取猪皮胶原蛋白并去除端肽，利用盐洗和超滤纯化胶原蛋白，冷冻干燥后获得高纯度海绵状去端肽胶原蛋白。本申请所述的制备方法工艺过程简单、高效，经蛋白质凝胶电泳及LC‑MS/MS检测，获得的胶原蛋白产物不包含胶原蛋白端肽，且结构完整，生物活性保持完好，可直接用于医用及组织工程材料。

技术领域

本申请涉及生物医用材料制备领域，尤其涉及一种从猪皮中获取去端肽胶原蛋白的制备方法及胶原蛋白。

背景技术

人体皮肤的营养成分中超过70％为胶原蛋白，以细纤维的形式为皮肤提供弹性和紧致度，同时为表皮提供水分，使皮肤看起来光滑饱满，胶原蛋白的流失是引起皮肤老化的主要原因。因此，作为皮肤组织的主要组分，Ⅰ型胶原蛋白是纠正面部软组织缺陷的较为理想的材料。目前，胶原蛋白作为中国食品药品监督管理局CFDA批准的注射填充剂之一在整形美容外科中占有重要位置。相较于玻尿酸，胶原蛋白的三维结构具有更强的机械强度和稳定性。同时，近年来对胶原蛋白功能性研究证实，胶原蛋白可刺激真皮层纤维母细胞产生新的胶原蛋白，形成新的组织，产生修复和再生作用。因此，作为天然医美产品，胶原蛋白的抗衰老的作用机制更多样且作用效果更持久。由于胶原蛋白在生物进化上高度保守，因此动物来源的胶原蛋白与人体胶原蛋白具有高度的同源性，同型胶原在氨基酸的种类、数目和排列顺序上基本相同，因此，动物来源的胶原蛋白免疫原性极低，具有高度的安全性和生物相容性。基于此，注射类胶原蛋白产品有望成为继玻尿酸之后微整形行业新的增长点，市场开发潜力巨大。

目前，在胶原蛋白的制备过程中，还存在溶剂残留问题、耗时过长问题、胶原蛋白活性成分产率低问题、胶原蛋白物理性质不佳问题。同时，由于动物源胶原蛋白的两端端肽与人源胶原蛋白端肽差异较大，是胶原蛋白产品无法彻底克服引起免疫源性反应的根源。

发明内容

本申请的目的是，克服现有技术的不足，提供一种温和的、耗时短的、产量高的从猪皮中获取去端肽胶原蛋白的制备方法，并且获得相应的胶原蛋白。

为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，提供一种从猪皮中获取去端肽胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：

获取猪皮并进行脱脂处理；

制备成均质脱脂猪皮之后用蛋白提取液除去水溶性杂蛋白；

用胃蛋白酶和盐酸/乙酸提取猪皮中的胶原蛋白，获取提取液；

对所述提取液进行中性低温盐析，获取沉淀；

对所述沉淀进行精制处理之后，获得去端肽胶原蛋白。

优选地，所述猪皮来源于SPF级动物；所述猪皮来源于三月龄的猪。

具体地，所述脱脂处理包括：

配制脱脂剂；

将所述猪皮和脱脂剂按照固液体积比1：10进行混合之后搅拌脱脂；

去上清。

可选择地，所述脱脂剂选用0.1mol/L的NaOH、0.6％的SDS或2％的Na₂CO₃；脱脂的搅拌时间为2～8h。

优选地，进行所述脱脂处理之前，包括：去除所述猪皮表面脂肪，切成边长为毫米尺寸的小块。

优选地，制备所述均质脱脂猪皮用的溶液为磷酸缓冲液或10％的NaCl溶液；所述蛋白提取液为磷酸缓冲液或10％的NaCl溶液。