[发明专利]一种探针、检测试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种探针、检测试纸条及其应用。包括单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子。本发明首次在免疫检测中用聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子构建探针，可实现高灵敏目标物检测，检测限低至0.002ng/mL，与单纯的氧化铱纳米粒子试纸条和传统金标试纸条的灵敏度相比，分别提高24倍和180倍。此外，本发明具有很好的应用前景，可以作为检测各种食品有害小分子分析物的通用检测方法。同时，能成功应用于猪肉、猪肝和牛肉样品中的沙丁胺醇检测。

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种用聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子的方法作为信号载体，通过标记抗体制备探针，使用了该探针的试纸条，及其快速检测的应用。

背景技术

近年来，免疫层析试纸条，由于其快速、灵敏度高、特异性好，并且成本较低，受到了广泛的关注，成为现场快速检测的重要手段，主要用于监测低浓度的分析物，例如病毒，癌症生物标志物，细菌和毒素等。金纳米颗粒(AuNPs)具有无与伦比的生物相容性和独特的光学性能，是检测SAL的常用信号标签。然而，基于金纳米粒子的免疫层析试纸条的稳定性差和灵敏度低，严重阻碍了其进一步的应用。幸运的是，由于氧化铱纳米粒子(IrO₂NPs)简单的合成方法和出色的化学稳定性，它们有望成为AuNPs的替代信号标签。但是，在标记单克隆抗体(mAbs)的过程中，由于IrO₂ NPs的粒径太小，很难通过高速离心获得完整的探针，从而导致部分mAbs的损失。因此，有必要探索一种增大IrO₂ NPs粒径使其与未标记的mAbs易分离的复合材料，避免抗体的浪费。

沙丁胺醇(SAL)是一种速效β-2肾上腺素受体激动剂，通常被称为“瘦肉精”。在养殖业中，当SAL剂量比正常治疗剂量高5-10倍时，它可以显着增加瘦肉含量，同时减少脂肪沉积，从而可以显著提高经济效益。然而，一些研究表明，动物组织中残留的SAL对人体健康产生负面影响，并引起一些临床症状，如心悸、肌肉震颤、头晕、大量出汗和发冷等。迄今为止，已经报道了检测动物源食品中沙丁胺醇的几种分析方法，包括液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱法(GC-MS)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、表面增强拉曼散射(SERS)和电化学检测。尽管这些常规方法可以提供高度灵敏的检测并获得准确的结果，但它们需要昂贵的仪器，专业操作人员，繁琐的样品预处理步骤和耗时的过程，这阻碍了它们在现场和快速检测中的应用。为了更灵敏地检测沙丁胺醇，特别是现场快速检测，实现易于快速、便捷和价格低廉方法仍然是巨大的技术挑战。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种探针、检测试纸条及应用。基于聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子作为信号载体，通过标记抗体制备探针，该探针具有出色的稳定性，光学性能以及更高的亲和力，可以通过简单的物理吸附快速标记单克隆抗体，从而避免了使用复杂的交联剂，同时大大提高了灵敏度。

为达到上述技术效果，本发明采取的技术方案为：

一种探针，包括单克隆抗体和信号载体，所述的信号载体为聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子；

氧化铱纳米粒子的粒径为17～21nm；聚多巴胺修饰层的厚度为9～13nm。

可选的，制备方法包括：

(1)制备氧化铱纳米粒子溶液：按质量比为5:3混合柠檬酸三钠和K₂IrCl₆制备成溶液，在加热回流反应及碱性条件下反应制备；

(2)制备聚多巴胺修饰的氧化铱纳米粒子：将(1)中制备得到的氧化铱纳米粒子溶液(1mL)加入氧化剂，及按照体积比100:1加入10mg/mL盐酸多巴胺溶液混合制备。

可选的，氧化铱纳米粒子溶液的制备具体包括包括：