[发明专利]用于N-MID骨钙素检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于N‑MID骨钙素(N‑MIDOsteocalcin)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，重复性好，检测范围宽。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

技术领域

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于N-MID骨钙素(N-MID Osteocalcin)检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。

背景技术

N-MID骨钙素(N-MID Osteocalcin)是成熟成骨细胞分泌的一种非胶原骨基质蛋白，占骨基质中非胶原蛋白成分的25％，骨总蛋白的2％。完整的骨钙素有49个氨基酸组成，相对分子质量为5800。血清中的骨钙素具有多样性，约1/3为完整骨钙素(即全段骨钙素)，1/3为骨钙素N端中分子(N-MID)片段，1/3为氨基酸短肽。骨钙素是成骨细胞功能和骨质矿化的特殊标志物，作为骨转换标志物逐渐被临床应用。N-MID是骨基质中重要的一种特异非胶原蛋白，与骨钙的结合作用依赖于维生素K，其含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。N-MID含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进等。

到目前为止，用于检测人体血清样本中N-MID骨钙素(N-MID Osteocalcin)的含量的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

发明内容

本发明提供了一种用于N-MID骨钙素(N-MID Osteocalcin)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于N-MID骨钙素(N-MID Osteocalcin)检测的组合物，包括N-MIDOsteocalcin试剂Ra、N-MID Osteocalcin试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；

所述N-MID Osteocalcin试剂Ra包括含生物素标记的抗N-MID Osteocalcin单克隆抗体；

所述N-MID Osteocalcin试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗N-MID Osteocalcin单克隆抗体；

所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。

在本发明的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。

在本发明的一些具体实施方案中，所述N-MID Osteocalcin试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述N-MID Osteocalcin试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。

在本发明的一些具体实施方案中，所述N-MID Osteocalcin试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗N-MID Osteocalcin单克隆抗体与生物素混合，制得所述N-MID Osteocalcin试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。