[发明专利]一种甲钴胺片中有关物质新的测定方法

说明书

本发明提供一种甲钴胺中有关物质的测定方法，包括以下步骤：S1配制流动相：分别配制磷酸二氢钾溶液、流动相A溶液和流动相B溶液；S2配制供试品溶液；S3配制对照品储备溶液：分别配制羟钴胺储备溶液、维生素B12储备溶液和甲钴胺储备溶液；S4配制对照品溶液；S5配制辅料溶液；S6配制灵敏度溶液；S7配制系统适用性溶液；S8色谱分析测定，根据液相色谱图分析测定甲钴胺片杂质含量；该方法专属性更强，控制甲钴胺片杂质限度，从而更有效地控制产品质量，为有关物质研究提供一定的基础。

技术领域

本发明涉及药物分析的技术领域，具体涉及一种甲钴胺片中有关物质新的测定方法。

背景技术

甲钴胺为内源性维生素B12，存在于血液、髓液中，与维生素B12相比，其对神经元的传导有良好的改善作用，可通过甲基转换反应促进核酸-蛋白-脂肪代谢，其作为甲硫氨酸合成酶的辅酶，可使高半胱氨酸转化为甲硫氨酸，参与脱氧核苷合成胸腺嘧啶过程，促进核酸、蛋白合成，促进轴索内输送和轴索再生及髓鞘的形成，防止轴突变性，修复被损害的神经组织。甲钴胺片对周围神经病变具有良好的治疗作用，临床价值较高。

由于本身化学性质的不稳定，甲钴胺在强光下会降解生成羟钴胺。羟钴胺、甲钴胺原料及甲钴胺片制备及储运过程中可能引入的其他杂质统称为有关物质。目前，中国药典中甲钴胺片有关物质的检测方法比较简单，控制单杂≤1.0％、总杂≤3.0％，单杂限度较宽泛，对已知杂质羟钴胺及维生素B12未做限度控制，因此产品质量控制存在一定隐患。

中国发明专利CN104122363A公开了一种甲钴胺片有关物质的测定方法，包括如下步骤：①供试品的制备：②对照品的制备；③采用高效液相色谱测定有关物质的含量，色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300～360nm，进样量为20μl，柱温为30℃，流速为0.5～1.5ml/min；梯度洗脱；④计算供试品中各杂质的含量，该方法虽然控制单杂含量≤1.0％，控制了总杂含量≤2.0％，但是单杂限度较宽泛，并且没有对RRT约1.09含量、RRT约1.20含量和羟钴胺含量做限度控制，因此还是对产品质量控制存在一定隐患。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种甲钴胺片中有关物质的测定方法，该方法专属性更强，控制甲钴胺片杂质限度(羟钴胺≤1.0％，杂质RRT约1.09≤0.5％，杂质RRT约1.20≤0.5％，单杂≤0.5％，总杂≤1％)，从而更有效地控制产品质量，为有关物质研究提供一定的基础。

为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种甲钴胺片中有关物质的测定方法，包括以下步骤：

S1配制流动相溶液：分别配制磷酸二氢钾溶液、流动相A溶液和流动相B溶液；

S2配制供试品溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，取适量甲钴胺片，加流动相A溶液超声使甲钴胺溶解，加流动相A溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液；

S3配制对照品储备溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，分别配制羟钴胺储备溶液、维生素B12储备溶液和甲钴胺储备溶液；

S4配制对照品溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，分别配制羟钴胺对照溶液、甲钴胺对照溶液和维生素B12对照溶液；

S5配制辅料溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，配制辅料溶液；

S6配制灵敏度溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，配制灵敏度溶液；

S7配制系统适用性溶液：在避光环境下，光强度≤5lx条件下，配制系统适用性溶液；

S8色谱分析测定，取系统适用性溶液，空白溶液，辅料溶液，灵敏度溶液，对照品溶液，供试品溶液适量，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，并根据液相色谱图分析测定甲钴胺片杂质含量。