[发明专利]一种新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法

说明书

本发明公开了一种新型新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法，其中，方法包括步骤：将RBD序列和IFN序列连接至Fc序列的两端，得到融合蛋白基因RBD‑Fc‑IFN；将所述融合蛋白基因RBD‑Fc‑IFN接入pCMV‑MCS‑3flag质粒，得到重组质粒pCMV‑RBD‑Fc‑IFN；将所述重组质粒pCMV‑RBD‑Fc‑IFN转染至293T细胞并培养预定时间后，收集转染上清液；对所述转染上清液进行纯化处理，得到RBD‑Fc‑IFN融合蛋白，即制得所述新型新冠病毒亚单位疫苗。本发明制备的新型新冠病毒亚单位疫苗有效解决了RBD亚单位疫苗在临床应用中遇到的半衰期短、免疫原性较弱以及联合使用IFN时存在不利因素的问题，为开发安全有效的新型SARS‑CoV‑2疫苗提供候选疫苗。

技术领域

本发明涉及生物疫苗技术领域，尤其涉及一种新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法。

背景技术

冠状病毒是一类可在多种动物中引起不同严重程度的单股正链RNA病毒。自从公布SARS-CoV-2全基因组序列后，各国科研机构及制药公司都在积极开发SARS-CoV-2疫苗。针对SARS-CoV-2已建立多个不同的疫苗平台，包括灭活全病毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗和减毒活疫苗等，不同平台各有优缺点。

SARS-CoV-2棘突蛋白(Spike，S)位于病毒最外层，参与病毒与宿主细胞表面受体的结合，是宿主中和抗体的重要作用位点和疫苗研发最重要的靶抗原。S蛋白在病毒表面以三聚体形式存在，在结构上可分为S1和S2两个亚基，其中S1亚基的331-524位氨基酸为其受体结合结构域(Receptor binding domain,RBD)，负责与细胞膜上特异性受体血管紧张素转化酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)结合，介导病毒进入细胞。SRAS-CoV-2S蛋白存在融合前和融合后两种构象形式，在天然状态下呈现不稳定的融合前构象(prefusion)，与ACE2受体结合介导病毒进入细胞过程中，S蛋白构象发生显著变化，转变为更稳定的融合后构象(postfusion)。除了构象不稳定，S蛋白序列较长且高度糖基化，直接使用全长S蛋白作为抗原设计，对体外表达和翻译后修饰要求较高。

鉴于S蛋白的复杂性，一个有效的策略是采用S蛋白核心区域RBD进行疫苗研发。基于RBD抗原设计的亚单位疫苗，不仅可以避免S蛋白构象变化问题，且可以诱导中和抗体产生。此外，亚单位更容易进行体外重组表达和放大，极大降低疫苗的开发和生产成本。然而，通常情况下亚单位疫苗存在半衰期短以及免疫原性较弱的问题，因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法，旨在解决现有RBD亚单位疫苗在临床应用中遇到的半衰期短、免疫原性较弱的问题。

本发明的技术方案如下：

一种新冠病毒亚单位疫苗的构建方法，其中，包括步骤：

提供编码SARS-CoV-2S蛋白331-524位氨基酸的基因序列，记为RBD序列；

提供编码人IgG1 Fc区的基因序列，记为Fc序列；

提供编码人或鼠IFN的基因序列，记为IFN序列；

将所述RBD序列和IFN序列连接至所述Fc序列的两端，得到融合蛋白基因RBD-Fc-IFN；

将所述融合蛋白基因RBD-Fc-IFN接入pCMV-MCS-3flag质粒，得到重组质粒pCMV-RBD-Fc-IFN；

将所述重组质粒pCMV-RBD-Fc-IFN转染至293T细胞并培养预定时间后，收集转染上清液；

对所述转染上清液进行纯化处理，得到RBD-Fc-IFN融合蛋白，即制得所述新冠病毒亚单位疫苗。