[发明专利]硫苷转运相关的甘蓝型油菜BnaA09.GTR2基因及其应用有效
| 申请号： | 202110361987.X | 申请日： | 2021-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN112877341B | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 张园园;何贻洲;刘胜毅;刘越英;黄军艳;程晓辉 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/10;A01H6/20 |
| 代理公司： | 深圳智趣知识产权代理事务所(普通合伙) 44486 | 代理人： | 崔艳峥 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转运 相关 甘蓝 油菜 bnaa09 gtr2 基因 及其 应用 | ||
1.一种基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体，所述基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体转入甘蓝型油菜能够获得种子中总硫苷含量降低的甘蓝型油菜材料，其特征在于，所述基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体对甘蓝型油菜BnaA09.GTR2基因进行定向编辑，所述BnaA09.GTR2基因的基因组区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；在甘蓝型油菜BnaA09.GTR2外显子区域选取以碱基NGG结尾的DNA片段作为靶位点；
所述靶位点的一条链具有5’-(N)XNGG-3’结构，其中(N)X中的X表示数目为X的一条碱基序列，(N)X中的N代表碱基A、G、C、T中的任意一种，X为19或20；所述靶位点序列如SEQ IDNO.4和SEQ ID NO.5所示。
2.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株中转入了权利要求1所述的基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体。
3.权利要求1所述的基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体在降低油菜种子中总硫苷含量中的应用，其特征在于，将所述基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体转化微生物培养表达，转化目标植物，获得BnaA09.GTR2基因敲除突变体，所述转化方式为农杆菌介导、花粉管通道法、基因枪法、显微注射法中的任意一种。
4.一种降低油菜种子中总硫苷含量的方法，其特征在于，所述方法包括在油菜中转入权利要求1所述的基因定向编辑CRISPR/Cas9重组载体，获得BnaA09.GTR2基因敲除突变体。
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