[发明专利]用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法

说明书

本发明属于生物分离技术领域，具体涉及用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法。该方法包括如下步骤：S1、将尿酸与水混合，并加入丙三醇，调节pH，混匀；S2、向混合溶液中依次加入丙三醇和水，调节pH，混匀直至尿酸完全溶解；本步骤丙三醇和水的体积均为S1中丙三醇和水体积的1/5；S3、对S2所得溶液进行定容及最终pH值调节；S4、将BHI干粉或MRS干粉与尿酸溶液混合，高压蒸汽灭菌，得所述培养基。该培养基可以在适宜肠道菌群培养的pH条件下提供高浓度尿酸，除甘油和磷酸二氢钾外在不引入其他外源性物质条件下可做到稳定、简易且适合常规实验室配置等特点，可用于高效降解尿酸肠道菌株的筛选，结果准确、可信度好。

技术领域

本发明属于生物分离技术领域，具体涉及用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法。

背景技术

尿酸(uric acid,UA)是嘌呤代谢的最终产物，其化学名为2,6,8三羟基嘌呤。正常人血尿酸水平男性不超过419umol/L，女性不超过359umol/L。尿酸代谢紊乱可直接导致高尿酸血症、痛风以及肾功能衰竭等疾病发生的风险，而且还与糖脂代谢、肥胖和胰岛素抵抗等疾病在遗传和病理机制上有密切的联系。

尿酸的代谢途径主要通过肾脏和肠道2个途径。通过肾脏途径达到降尿酸目的的方法主要为抑制关键酶如：黄嘌呤氧化酶和腺苷脱氨酶等的活性；促进尿酸的排泄及抑制肾脏对尿酸的重吸收；促进尿酸及其前体物质分解等。通过肠道途径达到降尿酸目的的方法主要为调节肠道菌群和工程菌的驯化等方式筛选出能够抑制黄嘌呤氧化酶活性的细菌；能够分解尿酸前体物质的细菌；以及能够直接分解尿酸的工程菌。目前通过肾脏途径降解尿酸的研究已经较为成熟，但通过肠道途径降解尿酸的研究较少。通过肠道途径体外驯化具有降解尿酸功能的工程菌成为目前行之有效的办法之一。体外驯化正常肠道菌使之具备尿酸分解功能需要提供高浓度尿酸环境，目前已报道的相关尿酸溶液浓度最高在30mmolL氨丁三醇(Tris)中为23.20mmol/L，在14.80mg/L蕲艾油中溶解度为0.07mmol/L。经测量30mmol/L Tris其pH值为9.5，而蕲艾油作为强刺激性具有杀菌活性对油性物质，二者均不适宜肠道微生物的生长。另外，尿酸还可溶解于强酸或者强碱溶液中，人体肠道pH在4.8-8.5之间，而肠道微生物最适宜生长环境要求pH值在6.5-7.5之间。因此，适合肠道微生物培养的高浓度尿酸溶液的获得是筛选和驯化高效降解尿酸菌株的关键。

发明内容

本发明的目的在于提供用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基及其制备方法，该培养基适用于筛选和驯化高效降解尿酸肠道微生物，可以提供稳定、操作简易且适合常规实验室配置等特点，可用于筛选具有高效降解尿酸功能的肠道微生物培养，可信度大，重复率好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

用于筛选肠道降解尿酸菌株的高尿酸培养基的制备方法，包括如下步骤：

S1、将尿酸与水混合，并加入丙三醇，调节混合溶液pH值至7.2-7.5，然后混匀；

所述尿酸、水和丙三醇的质量体积比为：1.65-1.7g：500mL：50mL；

S2、向S1的混合溶液中依次加入丙三醇和水，调节pH值至7.2-7.5，混匀直至尿酸完全溶解；本步骤加入的丙三醇和水体积均为S1中丙三醇和水体积的1/5；

S3、对S2所得溶液进行定容并调节pH值至7.2-7.5，得尿酸溶液；

S4、将BHI干粉或MRS干粉与10mmol的S3所得尿酸溶液混合，高压蒸汽灭菌，得所述培养基。

优选的，S1、S2和S3中，均采用1mol/L的磷酸二氢钾调节pH。

优选的，S2中，尿酸完全溶解以溶液中不再有有形物质存在，且静止30min不再有晶体析出为标准。