[发明专利]一种鲎试剂冻干微球及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鲎试剂冻干微球，其特征在于，所述鲎试剂冻干微球包括鲎的阿米巴细胞提取物和活性剂；

所述活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇和甘氨酸。

2.根据权利要求1所述的鲎试剂冻干微球，其特征在于，所述活性剂还包括鲎三肽。

3.一种如权利要求1或2所述的鲎试剂冻干微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将鲎的阿米巴细胞进行破碎处理，随后离心并萃取，得到阿米巴细胞提取物；

在水中将聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇、甘氨酸、任选地鲎三肽混合，得到活性剂溶液；

(2)将所述阿米巴细胞提取物和所述活性剂溶液混合，得到混合液；

(3)利用滴珠机将所述混合液滴入液氮中，冷冻成微球，随后进行预冻和冷冻干燥，得到所述鲎试剂冻干微球。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述活性剂溶液包括5～10％聚乙烯吡咯烷酮、2～5％乳糖、5～10％甘露醇、1～5％棉子糖、0.2～1％聚乙二醇、0.5～1mg/mL甘氨酸和0～0.8mg/mL鲎三肽。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述混合液中阿米巴细胞提取物和活性剂溶液的体积比为(1～5):1。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述预冻的温度为-60～-45℃。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述预冻的时间大于4h。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述冷冻干燥包括以下步骤：

(1’)于-45～-25℃、真空度为160～200ubar，将预冻后的微球保存8～12h；

(2’)于-25～-10℃、真空度为160～200ubar，将所述微球干燥6～10h；

(3’)于20～30℃、真空度为10～150ubar，将所述微球干燥8～12h。

9.根据权利要求3-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将鲎的阿米巴细胞进行破碎处理，随后离心并萃取，制备阿米巴细胞提取物；

在水中将聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、甘露醇、棉子糖、聚乙二醇、甘氨酸、任选地鲎三肽混合，制备含有5％～10％聚乙烯吡咯烷酮、2～5％乳糖、5～10％甘露醇、1～5％棉子糖、0.2～1％聚乙二醇、0.5～1mg/mL甘氨酸和0～0.8mg/mL鲎三肽的活性剂溶液；

(2)按体积比为(1～5):1将所述阿米巴细胞提取物和所述活性剂溶液混合，得到混合液；

(3)利用滴珠机将所述混合液滴入液氮中，冷冻成微球，随后于-60～-45℃进行预冻4h以上；

(4)于-45～-25℃、真空度为160～200ubar下将预冻后的微球保存8～12h，使所述微球内的水分部分升华；

(5)于-25～-10℃、真空度为160～200ubar将所述微球干燥6～10h；

(6)于20～30℃、真空度为10～150ubar将所述微球干燥8～12h，得到所述鲎试剂冻干微球。

10.如权利要求1或2所述的鲎试剂冻干微球在制备细菌内毒素检测试剂和/或真菌葡聚糖检测试剂中的应用。