[发明专利]乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物及其筛选方法

说明书

本发明公开了一种乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物及其筛选方法。1)收集HBV‑ACLF肝组织标本，2)运用TMT标记定量的蛋白组学技术检测肝组织样本的蛋白组，3)比较健康对照，慢乙肝患者，乙肝肝硬化患者肝组织中的蛋白组，分析处理数据，获得HBV‑ACLF生物标记物，4)从步骤3)所述的HBV‑ACLF生物标记物中确定死亡风险的生物标记物。血清蛋白PLMN高于40 g/mL的患者的累积生存时间显著长于低PLMN组患者。

技术领域

本发明涉及血液中乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物及其筛选方法。

背景技术

慢加急性肝衰竭 (acute-on-chronic liver failure，ACLF) 是一种以肝功能急性损害，炎症和多器官衰竭为主要表现的临床综合征，其病情发展迅速，短期死亡率高。全世界约3.5亿人感染乙肝病毒 (hepatitis B virus， HBV)，是ACLF主要病因之一。而在我国乃至大多数亚太地区，HBV是ACLF最主要的病因，70%以上ACLF患者由HBV感染所致。因此，HBV-ACLF给世界尤其是亚太地区带来沉重的卫生健康负担。但目前，对于HBV-ACLF的诊治还缺乏可靠的预后标志物，常用的预后模型，包括终末期肝病模型 (the model for endstage liver disease， MELD)，欧洲慢性肝衰竭研究协会 (the European Associationfor the Study of Chronic Liver Failure CLIF) 推出的 CLIF-C ACLF模型等，对HBV-ACLF患者预后预测价值均存在争议。

近年来，蛋白组学技术的运用，使得疾病生物标志物的发现和鉴定获得长足的发展。由于血液样本具有创伤少，获得容易等特点，使得血液成为理想的蛋白来源。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物及其筛选方法。

一种基于患者临床数据和蛋白组学的乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物筛选方法，包括下列步骤：

1) 收集肝组织标本，包括健康对照、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者以及HBV-ACLF肝组织标本；

2) 运用TMT标记定量的蛋白组学技术检测肝组织样本的蛋白组；

3) 比较健康对照、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者肝组织中的蛋白组，分析处理数据，获得HBV-ACLF生物标记物；步骤3)包括：

（A）经质谱原始数据MaxQuant软件搜库鉴定后，剔除非Swiss prot数据库蛋白，再剔除污染蛋白及诱骗数据库蛋白，最后剔除特异性肽段少于2个的蛋白;

(B) 根据FDR  0.05的原则，筛选HBV-ACLF组与其他组的差异表达蛋白；

（C）在差异表达蛋白中筛选血清DDA（血清蛋白表达谱）可检测的蛋白;

(D)筛选肝组织特异性表达及差异倍数大于2倍的蛋白；

（E）筛选适用于PRM（Parallel Reaction Monitoring）的蛋白为HBV-ACLF生物标记物；

 4)从步骤3) 所述的HBV-ACLF生物标记物中确定乙肝慢加急性肝衰竭预后的蛋白标记物。

所述的步骤4)包括：（A）收集HBV-ACLF患者临床资料，包括入院检验及检查数据，并发症情况；将患者根据30天是否存活分为生存组和死亡组；

（B）采用SPSS 22.0软件，利用logistic回归分析，结合临床资料及筛选出的蛋白标记物，建立预测HBV-ACLF患者30天是否死亡的预后预测模型；