[发明专利]黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE及其应用

说明书

本发明属于植物分子生物学、基因工程技术领域，具体涉及一种黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE及其应用，该基因全长编码区序列见SEQ ID NO.1，其编码的氨基酸序列见SEQ ID NO.2。以高抗白粉病品系黄瓜B21‑a‑2‑1‑2为试材，克隆CsCSE基因全长编码序列并将其插入植物过表达载体pRI101；克隆CsCSE基因5’端特异性片段并将其插入病毒诱导基因沉默表达载体pTRV2，通过农杆菌介导瞬时转化黄瓜子叶。对转化株系进行白粉病菌接种鉴定，证明了CsCSE基因在黄瓜抗白粉病菌过程中的正调控作用，为实际生产中培育抗病、稳产黄瓜新品种提供理论依据，对我国蔬菜产业具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于植物分子生物学、基因工程技术领域，具体涉及一种黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE及其应用。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus)是我国设施园艺栽培的重要经济作物之一，在蔬菜产业中扮演着重要的角色。随着种植密度加大、连作种植等，黄瓜在栽培中常遭受各种病原菌的侵染，其中白粉病尤为严重。黄瓜白粉病是由葫芦科白粉病菌(Erysiphe ciehoracearum)以及单丝壳白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)引起的一种世界性气传真菌病害，其中S.fuliginea 更为常见。白粉病一旦发生，可使黄瓜减产高达50％，严重限制了我国黄瓜产业的发展。目前，选育和推广抗白粉病黄瓜新品种仍是防治和解决该病害最经济、有效的途径。因此，加强优质白粉病抗性相关基因的挖掘及抗病机理研究，对控制该病害发生和提高黄瓜产量具有重要意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE及其应用，为抗病品种的遗传改良提供一个新的基因资源。

本发明是这样实现的，提供一种黄瓜木质素生物合成关键酶基因 CsCSE，来自高抗白粉病品系黄瓜B21-a-2-1-2，具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

提供一种用于扩增上述的黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE的引物，为pRI101-CsCSE-F和pRI101-CsCSE-R，其核苷酸序列如下：

pRI101-CsCSE-F： 5’-CATATGCCCGTCGACATGGCTGCTCAACAACTAGATG-3’；

pRI101-CsCSE-R： 5’-GCTCACCATGGATCCTTTGATTTGGAGATCATCACATTCAGC-3’。

并且，引物5’端的前9个碱基为载体同源序列，紧接着的6个碱基为酶切位点序列，前15个碱基不属于CsCSE基因序列，但为构建重组植物过表达载体所必需。

提供一种上述的黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE编码的蛋白质，具有SEQID NO.2所示的氨基酸序列。

提供一种含有上述的黄瓜木质素生物合成关键酶基因CsCSE的重组植物过表达载体，所述载体为pRI101-CsCSE。

提供一种用于扩增上述的黄瓜木质素生物合成关键酶基因CSCSE特异性目的片段的引物，引物为pTRV2-CsCSE-F和pTRV2-CsCSE-R，其核苷酸序列如下：

pTRV2-CsCSE-F：5’-AAGGTTACCGAATTCATGGCTGCTCAACAACT AGATGG-3’

pTRV2-CsCSE-R：5’-GAGACGCGTGAGCTCCCTCATTTTGTTCCTGT TTTCTTTC-3’。

并且，引物5’端的前9个碱基为载体同源序列，紧接着的6个碱基为酶切位点序列，前15个碱基不属于CsCSE基因序列，但为构建重组植物过表达载体所必需。