[发明专利]一种乌拉尔醇在体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化方面的应用

说明书

本发明公开了一种乌拉尔醇在体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化方面的应用。本发明发现乌拉尔醇具有促进hASCs成骨分化的作用，可以用于体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化，用于制备促进人脂肪间充质干细胞成骨分化体外培养基。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及干细胞体外诱导分化，具体涉及一种乌拉尔醇在体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化方面的应用。

背景技术

组织工程技术已成为骨缺损修复最有前途的治疗方法之一。人脂肪间充质干细胞(hASCs)作为间充质干细胞的一个重要来源，在骨组织工程中受到广泛关注。利用诱导剂体外培养hASCs促进其定向分化是获得骨组织工程细胞的重要途径。但是，目前这类诱导剂较少。

乌拉尔醇(Uralenol，CAS登录号：139163-15-8)为一种较为常见的化合物，在多种植物中均存在，其化学结构如下：

发明内容

本发明的目的在于一种乌拉尔醇在体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化方面的应用。

实现本发明上述目的技术方案如下：

一种乌拉尔醇在体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化方面的应用。

一种乌拉尔醇在制备体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化的培养基方面的应用。

一种乌拉尔醇体外培养hASCs促进其向成骨细胞分化进而获得骨组织工程细胞用于治疗骨组织疾病的用途。

本发明的突出优点：

本发明发现乌拉尔醇具有促进hASCs成骨分化的作用，可以用于体外促进人脂肪间充质干细胞成骨分化，用于制备促进人脂肪间充质干细胞成骨分化体外培养基。

附图说明

图1为倒置显微镜观察的hASCs细胞形态；

图2中A为茜素红染色图；B为PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图；C为hASCs总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图。

具体实施方式

下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。

一、实验材料

L-DMEM培养基购自Thermo，胎牛血清购自GIBCO。

双抗、茜素红购自Sigma，Trizol试剂购自Invitrogen，M-MLV逆转录酶购自TaKaRa。

乌拉尔醇购自宝鸡市辰光生物科技有限公司，纯度98％。

二、实验方法

1、hASCs分离培养和鉴定

将皮下脂肪抽吸液装入离心管，加入适量Ⅰ型胶原酶于37℃恒温摇床消化1h，加入等体积L-DMEM培养基终止消化，1500r/min离心10min，弃上清。将沉淀用适量L-DMEM培养基吹打混匀，200目网过滤，收集滤液，1000r/min离心5min，弃上清。将沉淀用适量含10％胎牛血清和1％双抗的L-DMEM培养基吹打混匀，转入细胞培养瓶中，置于37℃、体积分数为5％CO₂、饱和湿度的培养箱中常规培养、传代。倒置显微镜观察细胞形态。

2、hASCs分组和诱导培养

将生长状态良好的第3代hASCs分成对照组和诱导组，对照组使用含10％胎牛血清和1％双抗的L-DMEM培养基培养，诱导组使用含20μg/mL乌拉尔醇、10％胎牛血清和1％双抗的L-DMEM培养基培养。

3、茜素红染色法鉴定成骨分化