[发明专利]一种凝结芽孢杆菌的筛选方法

说明书

本发明公开了一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，属于还原染料技术领域，包括如下步骤：凝结芽孢杆菌分离培养准备，取含凝结芽孢杆菌的样品与无菌水混合制成10^‑1g/ml的凝结芽孢杆菌原液，将凝结芽孢杆菌原液稀释成10^‑4～10^‑5g/ml浓度梯度富集培养，制得凝结芽孢杆菌富集培养液；凝结芽孢杆菌的初步筛选，将不同浓度的凝结芽孢杆菌富集培养液分别放置在培养皿中倾斜培养。本发明通过二次筛选能够提高凝结芽孢杆菌的筛选效率，改变传统的凝结芽孢杆菌的筛选的准确率；通过测试分离能够将凝结芽孢杆菌分离纯化能够提高凝结芽孢杆菌筛选效率。

技术领域

本发明涉及一种筛选方法，特别是涉及一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，属于微生物技术领域。

背景技术

凝结芽孢杆菌，革兰阳性，属于硬壁菌门，凝结芽孢杆菌分类学上属于芽孢杆菌属，细胞呈杆状，革兰氏阳性菌，端生芽孢，无鞭毛，分解糖类生成L-乳酸，为同型乳酸发酵菌，最适生长温度为45-50℃，最适pH为6.6-7.0。

现有的凝结芽孢杆菌存在以下不足：(1)现有的凝结芽孢杆菌的筛选的过程复杂，筛选效率低；(2)现有的凝结芽孢杆菌的筛选准确性较低。

发明内容

本发明的主要目的是为了解决现有技术的不足，而提供一种凝结芽孢杆菌的筛选方法。

本发明的目的可以通过采用如下技术方案达到：

一种凝结芽孢杆菌的筛选方法，包括如下步骤：

步骤1：凝结芽孢杆菌分离培养准备

取含凝结芽孢杆菌的样品与无菌水混合制成10^-1g/ml的凝结芽孢杆菌原液，将凝结芽孢杆菌原液稀释成10^-4～10^-5g/ml浓度梯度富集培养，制得凝结芽孢杆菌富集培养液；

步骤2：凝结芽孢杆菌的初步筛选

将不同浓度的凝结芽孢杆菌富集培养液分别放置在培养皿中倾斜培养；

步骤3：凝结芽孢杆菌的二次筛选

取初筛后的凝结芽孢杆菌培养皿划线培养，并取筛选后的菌株接种种子振荡离心培养，去除上清液，将凝结芽孢杆菌梯度溶液平板计数，然后用无菌培养液培养一段时间；

步骤4：凝结芽孢杆菌的测试分离

将平板上的凝结芽孢杆菌形成的菌落，分离纯化，得到凝结芽孢杆菌。

优选的，所述凝结芽孢杆菌原液稀释浓度分别为0.6×10^-4g/ml、0.8×10^-4g/ml、0.5×10^-5g/ml和0.8×10^-5g/ml。

优选的，所述凝结芽孢杆菌富集培养所需的物质为：每1L水取用蛋白胨13克、牛肉粉2.0克和氯化钠4.0克，pH值为7.4±0.1。

优选的，所述步骤2和步骤3中所述培养条件均为在恒温培养箱中35±0.5℃培养2～4天。

优选的，所述培养皿清洗培养，倾斜的角度为15～25°，且不同浓度的凝结芽孢杆菌富集培养液的倾斜角度不同。

优选的，所述培养皿划线培养中划线操作步骤如下：

步骤1：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样；

步骤2：:将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰，右手持含菌的接种环，先在一个区域轻巧地划3～4条连续的平行线当作初步稀释的菌源；