[发明专利]水胺硫磷半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用有效
申请号: | 202011285140.X | 申请日: | 2020-11-17 |
公开(公告)号: | CN112480167B | 公开(公告)日: | 2022-07-08 |
发明(设计)人: | 万宇平;王兆芹;何方洋;马玉华;崔海峰;王琳琛 | 申请(专利权)人: | 北京勤邦生物技术有限公司 |
主分类号: | C07F9/24 | 分类号: | C07F9/24;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/577 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 水胺硫磷 半抗原 人工 抗原 抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种水胺硫磷半抗原,其特征在于,其具有如下结构式:
2.如权利要求1所述的水胺硫磷半抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)在催化剂存在下,将4-硝基水杨酸和异丙醇进行酯化反应,纯化后得到4-硝基水杨酸异丙酯;
2)在催化剂存在和碱性条件下,将4-硝基水杨酸异丙酯和O-甲基硫代磷酰二氯进行缩合反应,纯化后得到4-硝基水杨酸异丙酯硫磷;
3)将4-硝基水杨酸异丙酯硫磷和氨气进行氨化反应,纯化后得到硝基水胺硫磷;
4)在催化剂存在下,将硝基水胺硫磷和氢气进行还原反应,纯化后得到水胺硫磷半抗原。
3.如权利要求2所述的水胺硫磷半抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤1)包括如下步骤:取4-硝基水杨酸1.83g,加入20mL异丙醇溶解,充分搅拌,加入0.5mL浓硫酸,室温搅拌3h,停止反应,加入200mL水,再加入100mL乙酸乙酯萃取,有机相加100mL水震荡、洗涤,浓缩蒸干,得到4-硝基水杨酸异丙酯。
4.如权利要求2所述的水胺硫磷半抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤2)包括如下步骤:在4-硝基水杨酸异丙酯中直接加入80mL二氯甲烷溶解,加入1.64g O-甲基硫代磷酰二氯,充分搅拌,加入3mL三乙胺,室温搅拌4h,停止反应,加入100mL水,补加100mL二氯甲烷萃取,有机相加60mL饱和食盐水震荡、洗涤,浓缩蒸干,上硅胶柱,用二氯甲烷和甲醇体积比为10:1的混合溶剂洗脱分离,得到4-硝基水杨酸异丙酯硫磷。
5.如权利要求2所述的水胺硫磷半抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤3)包括如下步骤:在4-硝基水杨酸异丙酯硫磷中直接加入100mL二氯乙烷溶解,在搅拌下通入氨气,室温反应2h,停止反应,加水50mL×3,洗涤3次,有机相浓缩蒸干,得到硝基水胺硫磷。
6.如权利要求2所述的水胺硫磷半抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤4)包括如下步骤:在硝基水胺硫磷中直接加入100mL甲醇溶解,加入0.5g润湿的钯-碳,排尽空气,通入氢气,室温搅拌2h,停止反应,抽滤,蒸干,上硅胶柱,用二氯甲烷和甲醇体积比为5:1的混合溶剂洗脱分离,得到水胺硫磷半抗原。
7.一种水胺硫磷人工抗原,其特征在于,其是载体蛋白和权利要求1所述的水胺硫磷半抗原偶联得到的偶联物。
8.如权利要求7所述的水胺硫磷人工抗原,其特征在于,所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。
9.一种水胺硫磷抗体,其特征在于,它是由权利要求7所述的水胺硫磷人工抗原经动物免疫得到,其能与水胺硫磷发生特异性免疫反应。
10.一种权利要求9所述的水胺硫磷抗体在检测水胺硫磷残留中的应用。
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