[发明专利]一种老年便秘动物模型的构建及其用途

权利要求书

1.一种老年便秘动物模型的构建，其特征在于：所述老年便秘动物模型为阳虚型老年便秘动物模型；每日对模型组大鼠皮下注射300 mg/kg的D-半乳糖，从第7周开始，按首剂量5 mL/只灌胃给予大鼠白醋，此后单双日交替灌喂白醋和活性炭冰水混合物，白醋的剂量是3 mL/200g，活性炭冰水混合物的剂量是5 mL/200g；其中白醋的总酸度g/100g为6度，活性炭冰水混合物中含有16.67 mmol/L活性炭，连续5周；造模周期共为11周；

造模完成后，收集动物粪便进行核磁共振分析和多元统计分析，得到20生物标志物，具体为：Alanine、Asparagine、Aspartate、Betaine、Butyrate、Citrate、Creatinine、Glucose、Glutamate、Glutamine、Isobutyrate、Isoleucine、Lactate、Leucine、Methionine、Phenylalanine、Propionate、Pyruvate、Scyllo-Inositol、Threonine；

结合20个生物标志物的含量统计学分析，若模型大鼠血清中：

模型大鼠粪便中Betaine、Butyrate、Glucose、Scyllo-Inositol含量显著下调，具体含量变化如下：

Betaine的积分面积均数从正常鼠的0.576916 ± 0.138669317下降到0.364879 ±0.055045628，P 0.001；

Butyrate的积分面积均数从正常鼠的2.054152125 ± 1.132002605下降到0.845627875 ± 0.406826504，P 0.05；

Glucose的积分面积均数从正常鼠的0.163973388 ± 0.055315766下降到0.050115913 ± 0.033780499，P 0.001；

Scyllo-Inositol的积分面积均数从正常鼠的0.237631667 ± 0.087895853下降到0.129596283 ± 0.025747797；P 0.05；

模型大鼠粪便中Alanine、Asparagine、Aspartate、Citrate、Creatinine、Glutamate、Glutamine、Isobutyrate、Isoleucine、Lactate、Leucine、Methionine、Phenylalanine、Propionate、Pyruvate、Threonine含量显著上调，具体含量变化如下：

Alanine的积分面积均数从正常鼠的0.6795905 ± 0.115019777上升到1.2881475 ±0.177238037，P 0.001；

Asparagine的积分面积均数从正常鼠的0.232976833 ± 0.048197673上升到0.4311975 ± 0.158855282，P 0.05；

Aspartate的积分面积均数从正常鼠的0.035562423 ± 0.020726677上升到0.07794175 ± 0.029437469，P 0.001；

Citrate的积分面积均数从正常鼠的0.038760118 ± 0.021153991上升到0.075742038 ± 0.02374747，P 0.001；

Creatinine的积分面积均数从正常鼠的0.341087375 ± 0.078463115上升到0.460051625 ± 0.098886616，P 0.05；

Glutamate的积分面积均数从正常鼠的0.36414925 ± 0.079438783上升到0.566018875 ± 0.091630705，P 0.001；

Glutamine的积分面积均数从正常鼠的0.069941167 ± 0.021113785上升到0.123925833 ± 0.012650315，P 0.001；

Isobutyrate的积分面积均数从正常鼠的0.075706625 ± 0.032514476上升到0.115289063 ± 0.035502651，P 0.05；

Isoleucine的积分面积均数从正常鼠的0.27580575 ± 0.099119943上升到0.431931125 ± 0.077826814，P 0.01；

Lactate的积分面积均数从正常鼠的0.8101775 ± 0.338191577上升到1.20282325± 0.279287306，P 0.05；

Leucine的积分面积均数从正常鼠的0.79796525 ± 0.231204982上升到1.150439125± 0.181783288，P 0.001；

Methionine的积分面积均数从正常鼠的0.281667 ± 0.050065168上升到0.385737± 0.046516487，P 0.001；

Phenylalanine的积分面积均数从正常鼠的0.140056375 ± 0.018575142上升到0.193468 ± 0.022584819，P 0.001；

Propionate的积分面积均数从正常鼠的1.066754333 ± 0.142348045上升到1.537661667 ± 0.331000035，P 0.05；

Pyruvate的积分面积均数从正常鼠的0.28044325 ± 0.063398877上升到0.422089375 ± 0.062680524，P 0.001；

Threonine的积分面积均数从正常鼠的0.785947 ± 0.120669645上升到1.26176 ±0.151115543，P 0.001；

则表明老年便秘动物模型造模成功，模型稳定；

所述20个生物标志物获取的具体方法为：在动物模型构建完成后，分别收集空白对照组大鼠与模型组大鼠的粪便，并对其分别进行核磁共振分析，得到空白对照组与模型组大鼠的¹H NMR谱图；使用MestReNova软件对所有的¹H NMR谱图进行总面积归一化处理得到积分数据，然后对空白对照组与模型组大鼠的¹H NMR谱图积分数据矩阵进行多元统计分析，得出空白对照组与模型组的大鼠粪便内源性代谢物的轮廓图，应用多元统计分析方法对代谢轮廓进行表征，采用主成分分析法对数据进行代谢轮廓分析，考察各组数据分离情况，得到老年便秘大鼠模型的代谢轮廓图和有显著差异的生物标志物，结合统计学分析，得到空白对照组与模型组大鼠粪便生物标志物的积分均值及变化趋势；

具体分析方法为：对核磁数据进行模式识别，得到空白对照组与模型组的主成分分析图，即PCA图，当模型组偏离正常对照组，且两组在第一主成分轴上的分离效果明显，证明老年便秘模型构建成功；

在PCA的基础上，利用正交偏最小二乘-判别分析法和排列测试对正常对照组和模型组大鼠粪便进一步分析，测试验证模型的适应度和预测能力；

最后，利用变量重要性VIP值 1.0，S-plot相关性绝对值 0.58并结合统计学P 0.05获得潜在的生物标志物；从对照组与模型组中找到含量变化显著的变量，然后对空白对照组与模型组大鼠粪便进行核磁分析，并按照总面积归一化积分的方法对得出核磁图谱进行积分，得出20个生物标志物的含量变化。