[发明专利]一种用于检测人类维生素D浓度的免疫层析试剂条

说明书

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其指一种用于检测人类维生素D浓度的免疫层析试剂条，包括样品垫、荧光垫、包被硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC衬底，所述荧光垫的上方喷抹有维生素D单克隆抗体标记荧光胶乳，所述包被硝酸纤维素膜包括包被有多克隆质控抗体的质控区和包被有维生素D‑蛋白偶联物的检测区，所述维生素D单克隆抗体标记荧光胶乳由链霉亲和素荧光纳米颗粒与生物素化维生素D单克隆抗体、生物素化质控抗体反应得到。本发明采用链霉亲和素荧光纳米颗粒与生物素化维生素D单克隆抗体、生物素化质控抗体反应，制备维生素D单克隆抗体标记荧光胶乳，利用链霉亲和素‑生物素系统的高度稳定性以及质控抗体配对展层的同步性，提升标记的稳定性和展层一致性，从而提高了检测重复性。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其指一种用于检测人类维生素D浓度的免疫层析试剂条。

背景技术

维生素D（简称VD）是一种脂溶性维生素，乃环戊烷多氢菲类化合物，一组结构上与固醇有关，功能上可防止佝偻病的维生素，最主要的是维生素D3与D2，前者由人皮下的7-脱氢胆固醇经紫外线照射而成，后者由植物或酵母中含有的麦角固醇经紫外线照射而成。维生素D的主要功用是促进小肠粘膜细胞对钙和磷的吸收。肠中钙离子吸收需要一种钙结合蛋白，1，25-二羟基维生素D3可诱导此蛋白合成，促进Ca2+吸收，又可促进钙盐的更新及新骨生成，也促进磷吸收与肾小管细胞对钙、磷的重吸收，故可提高血钙、血磷浓度，有利于新骨生成和钙化。

此外维生素D还有促进皮肤细胞生长、分化及调节免疫功能作用。一般成年人经常接触日光不致发生缺乏病，婴幼儿、孕妇、乳母及不常到户外活动的老人要增加维生素D供给量到每日10μg（相当于400国际单位）。缺乏维生素D儿童可患佝偻病，成人患骨质软化症。

目前市场上维生素D检测主要依赖国外进口的大型仪器，如罗氏、贝克曼等，这些大型仪器存在投入大、出值时间久等缺点。与本发明最相似的现有技术实现方案发明人韩雅君申请并获得授权的CN 104062440 A专利介绍了通过免疫层析技术平台检测血清中维生素D激素含量。该发明是一种微球免疫层析定量检测试纸，其包含：试纸检测区，数显区，手柄，样本垫，结合点，NC膜，吸水纸，粘性板低，点样孔，观察窗，读书框，荧光感应器，检测线，质控线，保护膜。现有技术主要的问题主要包括，大型仪器成本大，出值慢；小型便携式仪器，存在出值不稳定，易跳值的问题。

发明内容

针对上述现有技术存在的技术问题，本发明提供一种检测速度快、准确度高、重复性好的用于检测人类维生素D浓度的免疫层析试剂条。

为了达成上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测人类维生素D浓度的免疫层析试剂条，包括样品垫、荧光垫、包被硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC衬底，所述荧光垫的上方喷抹有维生素D单克隆抗体标记荧光胶乳，所述包被硝酸纤维素膜包括包被有多克隆质控抗体的质控区和包被有维生素D-蛋白偶联物的检测区，所述包被硝酸纤维素膜粘贴于所述PVC衬底的中部，所述样品垫和吸水纸粘贴于所述PVC衬底的两端，所述荧光垫设置于所述样品垫和包被硝酸纤维素膜之间；其中，所述维生素D单克隆抗体标记荧光胶乳由链霉亲和素荧光纳米颗粒与生物素化维生素D单克隆抗体、生物素化质控抗体反应得到。

进一步的，所述生物素化质控抗体由质控抗体与生物素反应得到，所述质控抗体为存在于鸟类、爬行动物和两栖类动物的IGY抗体。

进一步的，所述多克隆质控抗体为抗IGY抗体多克隆抗体。

进一步的，所述维生素D-蛋白偶联物的蛋白包括BSA和OVA。

进一步的，所述链霉亲和素荧光纳米颗粒由链霉亲和素与发光标记物反应得到，所述荧光纳米颗粒为内部含有荧光颗粒的纳米颗粒，所述纳米颗粒包括纳米金颗粒、纳米银颗粒和金纳米棒，所述发光标记物选自荧光素cy5、荧光素cy7、羧基荧光素、2-甲氧基荧光增强素、罗丹明和藻红蛋白中的任意一种。