[发明专利]一种尿液保存液及其制备方法和应用

说明书

本发明目的是针对现有技术的不足，提供一种尿液保存液：该尿液保存液在常温下即可长时间保存尿液样本，且能有效制尿液样本中DNA及游离DNA降解，防止细胞受损，维持细胞形态，抑制降解酶和微生物活性效果佳。本发明一种尿液保存液包括：一种或多种细胞保护剂、一种或多种抑制剂、一种或多种螯合稳定剂、一种或多种酸碱缓冲液。

技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种尿液保存液及其制备方法和应用。

背景技术

由于尿液获取方便、取材简单、无创、价廉、易行，尿液成为肿瘤筛查、诊断的理想样本。使用尿液进行癌症检测也越来越受到研究人员的关注。

目前尿脱落细胞学检查和尿液膀胱肿瘤标志物检查是膀胱癌诊断和术后随诊的常用检测方法，但迄今为止，对膀胱癌患者，没有任何一种尿肿瘤标志物能够取代膀胱镜检查和尿细胞学检查；而尿脱落细胞学检查对早期、低级别肿瘤的诊断价值有限，易受炎症的影响。

研究证明血浆cfDNA(游离于细胞外的DNA)部分是来自于肿瘤、胎儿和移植器官，在肿瘤发生的早期往往就已出现游离DNA含量的显著上升，同时肿瘤释放的游离DNA与肿瘤细胞本身的DNA特点存在一致性，能够反映肿瘤的特征性改变，所以在病理学确诊之前即可有目的的检测，实现对肿瘤的早期诊断，并对于肿瘤治疗方案的确定，肿瘤疗效的观察，肿瘤的预后评估，肿瘤转移风险分析及肿瘤复发监测具有重要潜在价值。

由于血浆游离DNA能够通过肾脏透进入尿液，并且尿液与膀胱粘膜直接接触，容易携带肿瘤细胞及其来源的游离DNA，尿液游离DNA检测是膀胱癌诊断和术后随诊的理想检测方法。

目前的尿液样本DNA保存方法是通过裂解细胞并抑制DNA酶活性，从而能够高效、长期保证DNA分子的完整性，所得样本中的尿液细胞内基因组DNA完全释放至尿液中与游离DNA混合，由于尿液中的游离DNA含量较少，与基因组DNA混合后容易使游离DNA的检出困难，导致尿液游离DNA的漏检，影响检测结果准确性。

因此，仍然迫切需要一种在常温下长时间有效抑制尿液样本中DNA与游离DNA降解同时防止细胞受损，且不影响相关分子检测的保存剂。

发明内容

本发明目的是针对现有技术的不足，提供一种尿液保存液：该尿液保存液在常温下即可长时间保存尿液样本，且能有效制尿液样本中DNA及游离DNA降解，防止细胞受损，维持细胞形态，抑制降解酶和微生物活性效果佳。

本发明一种尿液保存液包括：一种或多种细胞保护剂、一种或多种抑制剂、一种或多种螯合稳定剂、一种或多种酸碱缓冲液。

所述细胞保护剂选自N-(2，5-二氧代-4-咪唑啉啶基)尿素(尿囊素)、5，5-二甲基海因、碳酰二胺脲(尿素)、噁唑烷中的一种或多种。

所述抑制剂选自含脂肪族甲亚胺基的席夫碱及其二聚物、三聚物中的一种或多种。所述含脂肪族甲亚胺基的席夫碱选自N-乙酸甲亚胺或N-(3-乙酸-戊胺)甲亚胺中的一种或多种。

所述螯合稳定剂选自乙二胺四乙酸盐、草酸盐、肝素盐、枸橼酸盐中的一种或多种。

所述酸碱缓冲液为甘氨酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的一种，尿液保存液最终的pH值在3.0～8.0范围。

细胞保护剂与抑制剂的摩尔比为1∶0.1～1∶4.0。优选的，细胞保护剂与抑制剂的摩尔比为1∶0.1～1∶3.0。更进一步的，细胞保护剂与抑制剂的摩尔比为1∶1。

所述细胞保护剂的添加量为根据所需处理液体样品或产品制剂的体积而定。较佳的，处理液体样品或产品制剂时，每毫升液体样品或产品制剂添加0.001～5.0g。

所述抑制剂的添加量，按细胞保护剂与抑制剂的摩尔比计算添加。