[发明专利]一种以叶柄为外植体的河北杨组培快繁方法

说明书

本发明属于林业无性繁殖技术领域，具体涉及一种以叶柄为外植体的河北杨组培快繁方法，所述方法包括如下步骤：（1）以河北杨叶柄为外植体，进行无菌消毒处理；（2）将经步骤（1）处理过的所述河北杨叶柄切成一定长度的小段并接种于培养基中形成愈伤组织；（3）将步骤（2）中形成的愈伤组织接种于培养基中诱导所述愈伤组织分化形成不定芽；（4）将步骤（3）中的所述不定芽接种于培养基诱导培养获得生长健壮的组培苗。本发明以叶柄为外植体，取材方便、材料丰富、操作简单，诱导的愈伤组织可分化大量不定芽，不定芽生根快且生根率高、植株再生过程中繁殖率高，河北杨高效组织培养再生体系的建立，为其工厂化育苗和遗传改良研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于林业无性繁殖技术领域，具体涉及一种以叶柄为外植体的河北杨组培快繁方法。

背景技术

河北杨（Populus hopeiensis）又名椴杨、青杨等，是杨柳科杨属白杨派树种。河北杨生长迅速、耐寒、耐旱、根深、侧根发达、萌蘖力强，是水土保持、防风固沙和绿化造林优良树种。目前，扦插繁殖是河北杨繁育中最常采用，但存在生根难，成活率低等问题，无法满足对河北杨这一优良树种苗木的需求。河北杨组织培养的报道最早为1980年，林静芳等以河北杨茎段、叶柄、叶片为外植体进行了再生体系的初步研究，虽然获得了完整植株并移栽成活，但是并没有公布具体的培养方法和条件。之后的研究中均以茎段和叶片为外植体，再无以叶柄为外植体的研究报道。

发明内容

本发明的目的是根据上述现有技术的不足，提供了一种以叶柄为外植体的河北杨组培快繁方法，以河北杨叶柄为外植体，在1/2MS培养基附加不同浓度6-BA、NAA、IBA来进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽生根及组培苗扩繁，实现河北杨高效再生体系的建立。

本发明目的实现由以下技术方案完成：

一种以叶柄为外植体的河北杨组培快繁方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）以河北杨叶柄为外植体，进行无菌消毒处理；

（2）将经步骤（1）处理过的所述河北杨叶柄切成一定长度的小段并接种于培养基中形成愈伤组织；

（3）将步骤（2）中形成的愈伤组织接种于培养基中诱导所述愈伤组织分化形成不定芽；

（4）将步骤（3）中的所述不定芽接种于培养基诱导培养获得生长健壮的组培苗。

所述步骤（2）中的培养基的组分为：MS+6-BA0.3-1.0mg/L、NAA0.2-0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH控制在5.8-6.0。

使用所述培养基在温度为25±1℃的条件下暗培养使河北杨叶柄形成愈伤组织。

所述步骤（3）中的培养基的组分为：MS+6-BA0.3-1.0mg/L、NAA0.2-0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH控制在5.8-6.0。

使用所述培养基在温度为25±1℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d的条件下诱导愈伤组织分化形成不定芽。

所述步骤（4）中的培养基的组分为：1/2MS +IBA0.3-0.6mg/L、NAA0.05-0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH控制在5.8-6.0。

使用所述培养基在温度为25±1℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d的条件下培养不定芽。

所述步骤（2）中所述叶柄切成1cm小段。

本发明的优点是：以叶柄为外植体，取材方便、材料丰富、操作简单，诱导的愈伤组织可分化大量不定芽，不定芽生根快且生根率高、植株再生过程中繁殖率高，河北杨高效组织培养再生体系的建立，为其工厂化育苗和遗传改良研究奠定了基础。