[发明专利]一种阳离子脂质微泡的制备及其介导的基因递送方法

说明书

本发明公开了一种阳离子脂质微泡的制备及其介导的基因递送方法，制备步骤包括取DSPC，DSPE‑PEG2000，DOTAP，溶于有机溶剂中配制成溶液，将溶液超声处理，装入瓶中，去除有机溶剂加入缓冲液；瓶中空气置换为全氟丙烷，震荡制得阳离子脂质微泡，4℃保存；递送方法是：转染前培养细胞，阳离子脂质微泡和目的基因孵育，然后加入细胞，超声辐照转染，转染后培养过夜。本发明的优点有：提供了一种高基因递送效率的微泡，为UTMD介导的基因体外递送提供了解决方案操作相对简单无创两大优点，提高了基因转染效率。

技术领域

本发明属于基因递送技术领域，具体涉及一种基因递送的方法。

背景技术

超声靶向递送技术(Ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)为我们提供了一个安全有效的基因递送工具。随着超声造影剂的不断发展，UTMD应用于基因递送的实例逐渐增多。相对于其他非病毒类基因递送技术，UTMD介导的基因递送具有操作相对简单和无创两大优点。然而，成功实现基因递送的关键在于，保护基因在递送过程中免受血流剪切力作用及DNA酶的降解，以及定点、定向释放携载的基因至靶细胞发挥作用。UTMD的基本原理为：在超声微泡表面或者内部携带基因，在体外局部应用超声辐照，产生空化作用，提高细胞膜的通透性，有效促进基因向胞内递送。超声微泡作为一种新型的非病毒载体应用于基因治疗，已经被国内外众多学者所采用，与病毒载体相比，这种人工合成的基因“运输工具”，具有低免疫原性、基因载量大、容易制备、成本低等优点。有研究利用UTMD技术递送miR-126-3p，有效地降低靶基因的表达，提高了慢性贫血骨骼肌模型中的血管密度。在肿瘤方面，通过UTMD介导靶向lncRNA-ATB的siRNA转染肝癌细胞，成功下调了lncRNA-ATB的表达，抑制了肝癌细胞的转移和侵袭，另外，研究表明UTMD介导的siRNA转染的效率要高于脂质体转染。

因此，研发一种提高基因递送效率的基因载体及其相关制备方法是具有应用前景的。

发明内容

本发明的一个目的是建立一种阳离子脂质微泡制备方法，以获得高基因递送效率的微泡。

本发明的另一个目的是提供一种安全、有效、省时省力的基因体外递送方法，满足体外基因功能研究的需求。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种阳离子脂质微泡的制备方法，包括如下步骤：

(1)取DSPC，DSPE-PEG2000，DOTAP，溶于有机溶剂中配制成溶液，将溶液超声处理，装入瓶中；

(2)去除步骤(1)配制的溶液的有机溶剂，再往瓶中加入缓冲液；

(3)将步骤(2)加入缓冲液后的瓶中空气置换为全氟丙烷，震荡瓶中溶液，获得阳离子脂质微泡，4℃保存。

进一步地，所述步骤(1)中DSPC，DSPE-PEG2000，DOTAP，有机溶剂的用量之比为9mg：2mg：1mg：1mL；

所述步骤(1)中有机溶剂是氯仿。

进一步地，所述步骤(1)中溶液置于超声水浴锅中，超声处理30s。

进一步地，步骤(1)中配制的溶液分装在4个小瓶中，所述步骤(2)中将4个小瓶放置在旋转蒸发仪中，在65℃下旋转蒸发1h，使有机溶剂完全挥发，每个小瓶中均加入800μl含甘油的PBS缓冲液；

步骤(2)中缓冲液是含甘油的PBS缓冲液，甘油的质量与PBS缓冲液的体积之比是0.2％。

进一步地，所述步骤(3)中溶液在Vialmix^TM银汞调和器中剧烈震荡45s，获得阳离子脂质微泡悬液。

阳离子脂质微泡介导的基因递送方法，包括如下步骤：