[发明专利]一种H13N8重组流感病毒及应用

说明书

本公开属于流感疫苗技术领域，具体涉及一种H13N8重组流感病毒及应用。本公开构建了一种H13N8重组流感病毒，通过基因合成获得PR8病毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因，并将合成的基因通过同源重组的方式插入pFluDD双向表达载体中。将6个PR8病毒内部基因感染性克隆质粒与2个H13N8亚型流感病毒抗原基因感染性克隆按比例共转染293T细胞，将转染后的细胞悬液接种SPF鸡胚，收获血凝阳性的鸡胚尿囊液，获得H13N8重组流感病毒。将H13N8重组流感病毒灭活疫苗颈部皮下注射免疫3周龄SPF鸡，免疫后第4周，免疫组鸡血清中抗H13N8亚型流感病毒的血凝抑制效价达到160‑640。

技术领域

本公开属于流感疫苗技术领域，具体涉及一种H13N8重组流感病毒以及该重组流感病毒作为灭活疫苗的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道疾病。流感病毒即可以感染人类也可以感染多种动物，包括陆禽、水禽和野鸟等，对养殖业和公共卫生安全均构成严重威胁。流感病毒根据病毒基因组成和序列同源性等可分为A型、B型、C型和D型流感病毒，其中以A型流感病毒危害最大。近一百年来，人类一共发生过四次流感大流行，包括1918年西班牙流感、1957年亚洲流感、1968年香港流感和2009年甲型H1N1流感，四次流感大流行给人类社会造成重大伤害，研究表明四次流感大流行的病原均为A型流感病毒。

A型流感病毒是RNA病毒，由于病毒RNA聚合酶的错配率较高，因此病毒基因基因尤其是病毒主要抗原基因血凝素(Hemagglutinin,HA)基因和NA(Neuraminidase,NA)基因极易发生变异。截止目前为止，A型流感病毒一共有16种HA亚型和9种NA亚型。H13亚型流感病毒以往只在野鸟和水禽中被发现，不感染陆禽。发明人所在研究团队从2016年至今通过血清学调查在蛋鸡中发现H13亚型流感病毒存在的血清学证据，并在样品中检测到H13亚型流感病毒核酸的存在。以上研究结果表明H13亚型流感病毒对蛋鸡构成潜在威胁，由此有必要开展H13亚型流感病毒疫苗的研制，以应对将来出现的疫情威胁。

发明内容

基于上述研究背景，本公开构建了一种H13N8重组流感病毒，以流感病毒鸡胚适应株A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)(简称PR8病毒)作为骨架，包含H13N8亚型流感病毒抗原，其灭活后的产品用于蛋鸡免疫具有良好的血凝抑制效价。

基于上述研究结果，本公开提供以下技术方案：

本公开第一方面，提供一种H13N8重组流感病毒，所述重组流感病毒以鸡胚适应株PR8病毒内部基因为骨架，以H13N8亚型流感病毒的HA和NA基因为抗原；所述PR8病毒内部基因为PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因。

优选的，所述PB2基因序列如SEQ ID NO:1所示；

优选的，所述PB1基因序列如SEQ ID NO:2所示；

优选的，所述PA基因序列如SEQ ID NO:3所示；

优选的，所述NP基因序列如SEQ ID NO:4所示；

优选的，所述M基因序列如SEQ ID NO:5所示；

优选的，所述NS基因序列如SEQ ID NO:6所示；

优选的，所述HA基因序列如SEQ ID NO:7所示；

优选的，所述NA基因序列如SEQ ID NO:8所示。