[发明专利]一种金纳米团簇-金纳米棒免疫传感器对睾酮的检测方法

权利要求书

1.一种金纳米团簇-金纳米棒免疫传感器对睾酮的检测方法，包括：步骤1、荧光供体金纳米团簇和荧光受体金纳米棒的制备；步骤2、金纳米团簇和金纳米棒分别修饰连接；步骤3、对睾酮分子的检测，其特征在于：所述金纳米团簇与睾酮修饰连接，所述金纳米棒与睾酮抗体修饰连接；所述步骤3为：

1)混合：将同体积的金纳米团簇-睾酮溶液与睾酮抗体-金纳米棒溶液混合反应制备得混合液A；

2)混合液A荧光性能测试，检测不同条件下的荧光性能变化，选取荧光发射强度的变化绝对值最大时对应的检测条件，确定为最佳条件；

3)检测，将混合液A与待检测睾酮溶液混合，在上述步骤2)中所述的最佳条件下进行检测，根据荧光发射强度与紫外可见吸收强度的变化求得睾酮浓度；

所述金纳米团簇的制备方法为：

步骤A1：将10.0mM HAuCl₄溶液水稀释，再加入10.0mM谷胱甘肽(GSH)，各组份HAuCl₄、水、谷胱甘肽的体积比为1:(1-2):(0.5-1)，在90℃、1200rpm搅拌下进行反应30-70分钟得反应溶液a1；

步骤A2：将反应溶液a1在11000rpm下离心分离20-40分钟得上清液a2；

步骤A3：将上清液a2用透析膜透析40-60小时去除未反应的有机物得金纳米团簇液体a3；

步骤A4：将金纳米团簇液体a3冷冻干燥后得到金纳米团簇；

所述金纳米棒的制备方法：

步骤B1：在搅拌下冰冷NaBH₄溶液加入到在CTAB溶液中制备的HAuCl₄溶液中，溶液黄色变为棕色，表明形成金种b1；

步骤B2：将金种b1老化1-3小时以使未反应的NaBH₄水解；

步骤B3：将0.1mM CTAB溶液，4mM硝酸银溶液，25mM HAuCl₄水溶液和1mM HCl溶液依次加入混合，然后向其中加入0.0788mM抗坏血酸作为还原剂，并通过搅拌使混合物均匀化，得到混合物b3；上述CTAB溶液、硝酸银溶液、HAuCl₄水溶液、HCl溶液、抗坏血酸的体积比为100：(5-10):(1-2):(0.6-2):(0.5-1.2)；

步骤B4：向上述混合物b3中加入体积比为0.5-1.5％的金种，将整个溶液静置36小时后得到金纳米棒；

所述金纳米棒与睾酮抗体修饰连接为：

步骤D1：在磁力搅拌下，将10μg/mL睾酮抗体加入到47.8μg/mL金纳米棒中；搅拌10分钟后，加入3％PEG20000作为稳定剂制得混合物d1；各组份睾酮抗体、金纳米棒、PEG20000的体积比为：1:(50-85)：(0.13-0.4)；

步骤D2：将混合物d1搅拌15分钟并在4℃下储存，实现金纳米棒与睾酮抗体修饰连接，得到睾酮抗体-金纳米棒溶液；

所述金纳米团簇与睾酮修饰连接为：

步骤C1：将金纳米团簇溶液加入含有0.01mol/L，pH 7.4的PBS和4mg/mL EDC的混合溶液中制得混合溶液c1，并将混合溶液c1先搅拌5分钟，然后再搅拌20分钟来活化金纳米团簇上的游离羧酸基团；

步骤C2：将0.15mg/mL磺基-NHS加入到上述混合溶液c1中制得混合溶液c2，并将混合溶液c2搅拌20分钟；

步骤C3：将0.01mg/mL睾酮溶液加入到上述混合溶液c2中制得混合溶液c3，并在黑暗、37℃以下反应2小时后，将混合溶液c3在4℃下保存；各组份金纳米团簇溶液、PBS、EDC、磺基-NHS、睾酮溶液的体积比为1：3:(0.8-1.2)：(0.04-0.08)：(0.01-0.02)；

步骤C4：通过荧光光谱与紫外可见吸收光谱测试，得到金纳米团簇-睾酮及睾酮抗体-金纳米棒体系的光谱重叠；实现金纳米团簇与睾酮修饰连接得到金纳米团簇-睾酮溶液。