[发明专利]一种超高压协同抗菌剂对食品中单增李斯特菌的灭活方法

说明书

本发明公开了一种超高压协同抗菌剂对食品中单增李斯特菌的灭活方法，包括如下步骤：(1)配制LB1、LB2液体培养基；(2)单增李斯特菌的接种与活化：将单增李斯特菌由斜面培养基接种至LB1液体培养基中培养，得LB1菌液，取LB1菌液加到LB2液体培养基中培养，得LB2菌液；(3)超高压处理：分别向单增李斯特菌菌液中加入抗菌剂，获得单增李斯特菌菌悬液，将悬液真空无菌密封，进行超高压处理；(4)计数：将超高压处理后的单增李斯特菌进行培养计数。本发明极大地提高了灭活效果，亚致死损伤率低至15.24％，致死率高达100％，实现对单增李斯特菌的亚致死状态的控制，且能降低处理压力。

技术领域

本发明涉及灭菌方法，特别涉及一种超高压协同抗菌剂对食品中单增李斯特菌的灭活方法。

背景技术

传统食品工业一般采用热杀菌技术，但热处理过程中会破坏一些食品的天然风味和口感，并导致营养物质的损失。超高压技术作为一种非热杀菌技术，不仅能有效灭活食品中的单增李斯特菌(L.monocytogenes)，还能较好的保持食品原有的天然风味、口感和色泽，并减少营养物质的损失。但受到高压胁迫作用的单增李斯特菌会出现一种亚致死损伤的状态，其在适宜的环境下能完成修复，显示出致病性，对食品安全构成了潜在的危害。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供超高压协同抗菌剂对食品中单增李斯特菌的灭活方法。

技术方案：本发明提供一种超高压协同抗菌剂对食品中单增李斯特菌的灭活方法，包括如下步骤：

(1)配制LB1、LB2液体培养基：称取李氏增菌肉汤LB1和LB2基础溶于蒸馏水中，加热至完全溶解，高压蒸汽灭菌，备用；向上述处理后的LB1基础中无菌加入萘啶酮酸和吖啶黄素，制成LB1液体培养基，向上述处理后的LB2基础中无菌加入萘啶酮酸和吖啶黄素，制成LB2液体培养基，备用；

(2)单增李斯特菌的接种与活化：将单增李斯特菌由斜面培养基接种至LB1液体培养基中培养，得LB1菌液，取LB1菌液加到LB2液体培养基中培养，得LB2菌液；

(3)超高压处理：分别向单增李斯特菌菌液中加入肉桂醛、二甲基二碳酸盐、乳酸链球菌素，获得单增李斯特菌菌悬液，将悬液真空无菌密封，进行超高压处理；

(4)计数：将超高压处理后的单增李斯特菌进行培养计数。

进一步地，所述步骤(4)计数培养中采用的非选择性培养基为TSA-YE平板培养基。采用TSA-YE培养基有利于单增李斯特菌的生长于修复，提高计数的效率。

进一步地，所述TSA-YE平板培养基的配制方法为：称取含0.6％酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂于蒸馏水中，加热至完全溶解，高压蒸汽灭菌，即可。对培养基进行灭菌，造成无菌状态，排除对实验结果的干扰。TSA-YE培养基是非选择性培养基，受损的和正常的单增李斯特菌都能在此培养基上生长。

进一步地，所述步骤(4)计数培养中采用的选择性培养基为PALCAM培养基。PALCAM培养基是选择性培养基，受损的单增李斯特菌不能在此培养基上生长。对非目标菌的抑制性佳，选择性灵敏度最高，利于计数分析。

进一步地，所述PALCAM培养基的配制方法为：称取PALCAM培养基基础于蒸馏水中，加热至完全溶解，高压蒸汽灭菌，再无菌加入PALCAM选择性添加剂。PALCAM培养基由于加了选择性添加剂(盐酸吖啶黄素、硫酸多粘菌素B、复达欣)，受损单增李斯特菌不能在此培养基上生长。PALCAM是单增李斯特菌选择性分离的理想培养基。

进一步地，所述步骤(4)超高压处理中升压时间不超过3min，泄压时间不超过1min。

进一步地，所述步骤(4)高压处理后的单增李斯特菌置于冰上待测。置于冰上是为了制造低温状态，保证样品的原始状态。