[发明专利]CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达中分析方法，结合基因敲除、信号通路抑制等技术手段，证实CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达过程中的重要作用,通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达；采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化；将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较；对蛋白表达结果进行分析，得出检测基因毒性活性的相关结论。本发明用待筛选的化合物温育至少部分系统，并将系统中的蛋白表达与对照系统中的蛋白表达相比较，从而检测(前‑)基因毒性活性来进行。为CREB在Ang‑2调节VEGFR2表达中的分析提供了理论依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：血管生成是实体肿瘤细胞生长和转移的必要条件。血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)通过多种机制促进肿瘤血管生成与血流量增加，其结合并激活3种结构类似的Ⅲ型酪氨酸激酶受体即血管内皮细胞生长因子受体(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor，VEGFR)，VEGFR家族包含有3种亚型，即VEGFR1(F1t-1)，VEGFR2(KDR/Flk-1)和VEGFR3(Flt-4)。其中VEGFR1调节肿瘤血管的生成并影响微血管的数量；VEGFR2参与介导对内皮细胞的增殖过程，诱导肿瘤血管的形成；VEGFR3可调节肿瘤淋巴管的形成。因此VEGF和VEGFR特别是VEGFR1和VEGFR2是抗血管生成靶向治疗的主要靶标。

近几年免疫靶向疗法在临床诊疗中的作用有了较大进步，血管生成和血管相关疾病(包括肿瘤)密切相连，而血管的生成主要依靠血管生长因子(VEGF)和血管生长抑制因子的调控，其中最密切的是血管内皮生长因子及其受体(VEGFR)，特别是VEGFR-2。但是，国内外关于CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析甚少，缺少理论与临床研究。

综上所述，现有技术存在的问题是：国内外关于CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中的分析甚少，缺少理论与临床研究。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法。

本发明是这样实现的，一种CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法，所述CREB在Ang-2调节VEGFR2表达中分析方法包括以下步骤：

步骤一，通过蛋白表达单元对确定的蛋白进行表达；

步骤二，采用待筛选的化合物对部分蛋白表达单元进行优化；

步骤三，将蛋白表达量与设定的对照系统中的蛋白表达量相比较；

步骤四，对蛋白表达结果进行分析，得出检测(前-)基因毒性活性的相关结论。

进一步，所述步骤三中蛋白表达量的测定方法包括：利用SDS-PAGE跑全菌电泳，然后用使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描，确定目的蛋白占全菌蛋白的百分比；

所述灰度扫描仪使用修正方法对蛋白的图像进行修正，具体包括：

(1)获得最初蛋白扫描图像的灰度数据，设第j行的第i个传感器的最初蛋白扫描图像为Image[j][i]；

(2)根据扫描获得的灰度数据Image[j][i]，计算每个点的修正系数；

1)采样行数为N，传感器个数为M，逐个求第1个传感器的N行图像各对应点的平均值，得到行向量mVector[i]；

2)计算M各传感器行向量的平均值Average：