[发明专利]一种检测粮油中黄曲霉毒素B1的免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测粮油中黄曲霉毒素B1的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、黄曲霉毒素B1标准品、黄曲霉毒素B1的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测黄曲霉毒素B1的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测粮油中黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFT）是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉（A.flavus）、寄生曲霉（A. parasiticus）和集蜂曲霉（A. nonius）一些菌株产生的；黄曲霉的产毒能力由于菌株的不同而差异甚大；寄生曲霉的所有菌株都能产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是一种毒性很强的肝毒素，可引起肝脏的急性或慢性损害，它与乙肝病毒被认为是肝癌的最主要的两大诱因；除损害机体的肝脏以外，黄曲霉毒素对肾脏等其他多种组织器官也能造成严重损害，更为严重的是黄曲霉毒素已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的“三致”作用。黄曲霉毒素广泛存在于花生、玉米、麦类、稻谷等谷物农产品中，在通心粉、调味品、粮油和食用油等食品中也经常发现，严重危害人、畜、禽类健康。黄曲霉毒素 B1 被公认为是目前致癌力最强的天然物质，1993 年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。自从 1961 年发现黄曲霉毒素以来，黄曲霉毒素的种类越来越多。目前已分离鉴定出十二种，分别是黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、B1、M2、B2a、G2a、GB1、R0 和毒醇；从化学结构上看，各种黄曲霉毒素的结构非常相似，都含有一个双呋喃环和氧杂萘邻酮（香豆素），前者为基本毒性结构，后者可能与致癌有关。黄曲霉毒素的毒性比氰化物和砒霜大很多倍。目前已查明，黄曲霉毒素对人和很多种动物都表现出剧烈的毒性，而且具有明显的致癌能力；其中黄曲霉毒素 B1 毒性最大，致癌能力最强，G1、B1 其次，B2、G2 和 M2 较弱。黄曲霉毒素 B1 除致癌外，还能引起突变和导致畸形。黄曲霉毒素 B1 的LD 50 为0.249 mg/kg, 小于 1 mg/kg，属特剧毒物质，其毒性为氰化钾的 10倍、为砒霜的 68 倍。人们发现，黄曲霉毒素 B1 是目前所有已知致癌物中致癌力最强的一种。

关于黄曲霉毒素的检测方法已经出现了许多的化学检测方法，如气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、薄层层析法、分光光度法、液质联用仪（LC-MS）、气质联用仪（GC-MS）等。化学检测方法存在测试成本高、分析时间长、检测所需样品量大（通常500 mL）及前处理步骤繁琐等不足，无法在较大范围内系统、全面、快速分析黄曲霉毒素的含量。

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对黄曲霉毒素B1检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种粮油中黄曲霉毒素B1残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测粮油中黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中黄曲霉毒素B1残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、黄曲霉毒素B1标准品溶液、抗黄曲霉毒素B1的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。