[发明专利]使用N-甲基葡糖酰胺及其衍生物灭活病毒的方法

说明书

本公开内容涉及用于灭活病毒的方法。用N‑甲基葡糖酰胺灭活病毒的方法适用于生物活性药物，例如蛋白质亚基、蛋白质(酶，因子等)、重组蛋白、抗体、疫苗或基因疗法产品的纯化过程。此方法中使用的去污剂基于多个N‑甲基葡糖酰胺同系物，该同系物由通过酰胺键连接的亲水性葡萄糖部分和疏水性脂肪酸尾部组成。另外，这些基于糖的去污剂本质上是非离子的，其不破坏药物蛋白质、血浆生物制剂、非有包膜的病毒疫苗或腺相关病毒颗粒。纯化具有未鉴定的有包膜的病毒污染物的目标生物产物溶液的方法，包括将目标生物产物溶液与标准溶液一起温育，灭活步骤(a)的生物产物溶液中存在的任何潜在的有包膜的病毒污染物，测量步骤(b)的最终溶液中存在的灭活的病毒，将分开的目标生物产物溶液与N‑甲基葡糖酰胺溶液一起温育，测量步骤(d)的最终溶液中存在的灭活的病毒，并比较步骤(c)和步骤(e)的最终溶液的结果。

发明背景

生物治疗剂是从涉及任何种类的生物学起源的原材料，即细胞系、细胞培养液和组织或体液的过程产生的分子。生物衍生的治疗剂的制造是复杂的过程，其需要许多纯化步骤以确保安全性。考虑到沿途的每个步骤或过程可能存在微生物污染，它是尤其重要的。在重组蛋白产生的情况下，生物治疗剂通常通过培养工程化的人或动物衍生的细胞[即，中国仓鼠卵巢(CHO)或幼仓鼠肾(BHK)细胞]或杂交瘤细胞(即NS0)，以及进行纯化过程的一系列单元操作来制备，所述人或动物衍生的细胞包含含有目的基因(GOI)的质粒DNA。公知的是，CHO和BHK(Chan,S.Y.,1994,Wang G.等人1999和Suzuki A.等人1982)细胞具有编码内源逆转录病毒样颗粒(ERVLP)的染色体整合的原病毒元件。从全血或血浆中制备生物治疗制剂面临着血源性病原体，即乙肝病毒(HBV)、丙肝(HCV)病毒等污染原材料的挑战。此外，偶发物质可以引入制造中间体中，这对生产带来了更多挑战。迄今为止，存在有许多关于生物反应器病毒污染事故的报道(Hsieh,W.T.等人2008,Qiu Y.等人,2013)。特别地，很多年来病毒的灭活和/或除去已困扰生物制品业。一些原因包括衍生病毒的来源的可变性以及小的尺寸。

病毒分为有包膜的和非有包膜的组。内源逆转录病毒样颗粒是有包膜的并在CHO和BHK细胞及其相关培养液中发现，这对进一步纯化步骤、设施、仪器和环境产生污染的风险。尽管使用目前的方法尚未观察到传染性，但内源逆转录病毒样颗粒对患者和行业呈现潜在的风险。由于所有这些原因，从生产过程中快速且有效地灭活和/或除去这些污染物变得越来越重要。

去污剂已经在多种阵列和测定法中作为灭活病毒中的重要工具使用。从二十世纪80年代开始，去污剂已经提高血液样本池的安全性，对于需要输血或血液成分，例如血浆衍生的治疗产品的患者和处理样本的实验室人员。最近，去污剂已被广泛用于具有潜在病毒感染风险的生物治疗剂和/或疫苗的生产过程中。在生物药物制造中，用于有包膜的病毒灭活的最充分表征且高度有效的去污剂是非离子去污剂，例如Polysorbate(Tween-20，Tween-80)、Triton X-100(也称为Octoxinol-10)和磷酸三正丁酯(TnBP，经常与Polysorbate或Triton X-100一起用作溶剂)。Polysorbate在环境条件下但是在相对较高的浓度下高度有效，但是效力随温度降低而降低。因此，这些去污剂可能不是制造需要较低温度条件的生物材料的最佳选择，所述较低温度条件对于稳定生物活性和分子结构是重要的。

Triton X-100(也是Octoxinol、Octoxinol-3、Preceptin)是一种在灭活病毒中经典的、完善建立的有效去污剂。Triton X-100及其衍生物在非常低的温度下是高度有力的。已经表征了Triton-X 100的辛基酚成分与雌激素受体相互作用，导致暴露的动物的生殖影响。含有Triton X-100的生物过程废物会造成负面后果，特别是如果直接排放到环境中，对水生生命造成负面后果。从生物过程废物中处理或回收Triton X-100将是非常昂贵且麻烦的。寻求有效灭活病毒而不改变生物活性药物的新的环境友好的去污剂(或非生态毒性)一直是许多生物制药业的优先考虑。因此，发现有效、稳健且更加环境安全的去污剂一直是生物制药行业的高度优先。

发明概述