[发明专利]一种基于病毒样颗粒的C型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开一种采用C型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)制备的检测试剂盒及制备方法。本发明的试剂盒的制备方法是将HRP直接标记在跟被检抗体同时作用的竞争性抗体上，其内酶标板包被的C型口蹄疫病毒样颗粒是由C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP1和VP3组装而成。本发明采用的VLPs能高效组装，且不影响其诊断效率，有利于降低诊断制剂的成本。本发明方法相对现有技术的检测步骤有所减少，实验操作简单，工作量小，用时短，并可提高诊断试剂的特异性和敏感性。

技术领域

本发明涉及一种C型口蹄疫病毒样颗粒的竞争ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒引起的人兽共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，传播迅速，流行面广，幼龄动物死亡率较高。FMDV属于小RNA病毒，宿主范围广，可通过多种途径传播，造成世界范围内的大流行。其临诊症状是在口腔黏膜、四肢下端及乳房等处皮肤形成水疱和烂斑。FMD流行给世界养殖业造成了巨大经济损失。目前，国际动物卫生组织(OIE)将FMD列为法定上报传染病。FMDV具有多型性、易变异的特点，根据其血清型特性，可分为7个血清型，即A型、O型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型及Asia I型。C型口蹄疫最早于1962年被报道，与其他各型口蹄疫相比流行范围较小，目前仅在欧洲、南美、东非、北非、安哥拉以及南亚有报道。最近一次报道C型口蹄疫的爆发是2004年在巴西和肯尼亚。目前C型口蹄疫在我国还未见报道，但是我国周边国家和地区的口蹄疫疫情很严重，且有C型口蹄疫流行史，这使得我国的口蹄疫防控局势异常严峻。因此，快速、高效的诊断和监测技术对FMD的防控至关重要。

发明内容

本发明提供一种可克服现有技术不足，用于检测C型口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法。

本发明的C型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒内包括有：包被C型口蹄疫病毒样颗粒的酶标板、HRP标记的兔抗、含有吐温和磷酸盐缓冲液的样品稀释液和洗涤液、TMB底物、阳性对照血清、阴性对照血清、以及浓硫酸与水混合的终止液。

本发明的C型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒制备方法是将HRP直接标记在跟被检抗体同时作用的竞争性抗体上，其制备过程包括：用C型口蹄疫病毒样颗粒免疫兔，免疫结束后，从兔心脏采血，分离血清并用ProteinA亲和层析法分离纯化得到IgG，采用过碘酸钠方法将HRP标记到IgG上。

优选地，本发明的C型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒制备方法，其内酶标板包被的C型口蹄疫病毒样颗粒是由C型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP1和VP3组装而成，VP0、VP1和VP3的序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。

优选地，本发明的C型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒制备方法，其酶标板制备是用0.05％(pH＝9.6)的碳酸盐包被缓冲液将C型FMDV VLPs稀释为5μɡ/mL，以每孔100μL的量加入酶标板，4℃包被过夜，洗涤液洗板3次；加入以酶标板稳定剂配制的含1％BSA封闭液，每孔120μL，37℃恒温箱封闭1h，洗板3次，干燥，真空包装。

病毒样颗粒(VLPs)是由口蹄疫病毒的结构蛋白(VP1、VP2和VP3)组装形成的空心颗粒，具有和天然病毒粒子相同形态结构，不含病毒遗传物质，不能自主复制。同时结构蛋白组装成VLPs时，通过各亚单位之间的相互作用可以形成单个蛋白不具有的立体构象。因此相对于全病毒和单个病毒蛋白，本发明以VLPs作为抗原检测抗体具有更好的安全性和免疫原性。