[发明专利]一株死谷芽胞杆菌HSB-2及其应用

说明书

本发明涉及一株死谷芽胞杆菌HSB‑2及其应用；其保藏号为CGMCC No.15305，16S rDNA序列如SEQ.ID.NO.1所示；本发明还涉及死谷芽胞杆菌HSB‑2在制备减轻苹果连作障碍菌肥中的应用；死谷芽胞杆菌HSB‑2对引起苹果连作障碍的四种镰孢菌属病原菌有明显的拮抗作用。利用死谷芽胞杆菌HSB‑2制作的菌肥，能促进平邑甜茶幼苗地上部及地下部的生长，在根际可以稳定定殖并显著抑制土壤中引起苹果连作障碍的腐皮、层出、轮枝和尖孢四种镰孢菌属病原菌的生长，能显著提高土壤脲酶、磷酸酶和蔗糖酶活性及根系保护酶SOD、POD、CAT活性，能减轻连作障碍。

技术领域

本发明涉及一株死谷芽胞杆菌HSB-2及其应用，属于果树栽培领域。

背景技术

受土地资源限制，苹果连作现象普遍存在，导致苹果连作障碍发生。研究发现引起意大利地区苹果连作障碍的主要病原菌是腐皮镰孢菌(Fusarium solani)和尖孢镰孢菌(F.oxysporum)；王晓宝等研究表明，镰孢菌属有害真菌是造成西北黄土高原和环渤海湾地区苹果连作障碍发生的主要病原菌；徐文凤和刘志分别从环渤海湾苹果产区的老龄苹果园土壤中分离到大量的尖孢镰孢菌(F.oxysporum)、轮枝镰孢菌(F.verticillioides)、腐皮镰孢菌(F.solani)和层出镰孢菌(F.proliferatum)，并验证其对平邑甜茶幼苗具有强致病性，张先富等也提到尖孢、轮枝、腐皮和层出镰孢菌是苹果连作障碍的有害病原真菌。

目前，防治苹果再植病害最有效的措施是土壤熏蒸技术，但存在应用困难、成本高，以及危害环境和人类健康等诸多问题而难以应用或被逐渐淘汰。相比之下，生物防治是一种可以产生抑制病原体活性的代谢物，并诱导植株提高抗性的新型方法，且具有绿色环保、成本低、可持续发展等特点。林英等从醋糟基质中分离到一株死谷芽胞杆菌(Bacillusvallismortis)CZ可有效防治由立枯丝核菌引起的黄瓜立枯病；张猛等从番茄植株中分离到1株对西瓜枯萎病菌具明显拮抗作用的内生死谷芽胞杆菌(B.vallismortis)wm005并具有广谱的抑菌效果；陈倩倩等发现，暹罗芽胞杆菌(B.siamensis)FJAT-28592能够分泌iturin A类的脂肽来抑制尖孢镰孢菌；陈志杰等研究发现暹罗芽胞杆菌(B.siamensis)4-z-3分泌的胞外蛋白质类抗菌活性物质对多种植物病原真菌都有显著的抑菌作用，且抑菌活性稳定。然而，目前少有芽胞杆菌在防治苹果连作障碍方面的研究。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一株死谷芽胞杆菌HSB-2及其应用；本发明从老龄苹果园健康果树根际土中分离得到了一株具有促生抑菌效果的死谷芽胞杆菌HSB-2，采用平板对峙法研究其对尖孢镰孢菌、轮枝镰孢菌、层出镰孢菌和腐皮镰孢菌的拮抗作用，并验证了死谷芽胞杆菌HSB-2在果树根际土壤中的定殖情况及其抑菌效果，说明其能作为减轻苹果连作障碍的生物防控。

一株死谷芽胞杆菌(B.vallismortis)HSB-2，已于2018年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.15305。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所；其16S rDNA序列如SEQ.ID.NO.1所示。

所述死谷芽胞杆菌HSB-2从老龄苹果园健康果树根际土壤中分离得到，经鉴定为死谷芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)，命名为死谷芽胞杆菌HSB-2；HSB-2菌株在LB培养基上培养24h后，单菌落呈乳白色或微黄色，边缘不规则，表面褶皱干燥，粗糙不透明；在LB液体培养基中静止培养后有菌膜形成，好氧。扫描电镜下，HSB-2菌体呈杆状，两端钝圆，无鞭毛，大小为(0.6-0.8)μm×(1.8-2.2)μm。荧光显微镜100×/1.30油镜下观察，细胞呈短杆状，革兰氏染色呈阳性。能拮抗四种镰孢菌属病原菌。

本发明还涉及死谷芽胞杆菌HSB-2在制备减轻苹果连作障碍菌肥中的应用。