[发明专利]一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法

说明书

本发明公开了一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，取瘤胃液，加入丙酸钠和无机盐培养基于恒温摇床，避光培养，逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养，将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。本发明的有益效果是通过筛选驯化得到了一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌菌株，该菌株具有应用于饲料发酵，主要是牧草和秸秆的有氧发酵，起到改善饲料营养价值和降解部分污染物的作用。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，涉及一种耐受丙酸盐菌株的筛选、驯化及应用，所筛选和驯化的菌株Gordonia paraffinivorans ZM052将联合抑菌剂丙酸盐应用于饲料发酵，主要是牧草和秸秆的有氧发酵，起到改善饲料营养价值和降解部分污染物的作用。

背景技术

在微生物应用的领域，人们对抑菌剂的使用主要关注抑菌剂的适用范围，而针对于一种抑菌剂去获得相应的耐受菌的报道较少，从目前文献来看未见到利用丙酸盐来筛选和驯化耐受丙酸盐的细菌的相关报道，更未见到系统阐述抑菌剂与其耐受菌联合应用的报道。本技术方案旨在确立耐受丙酸盐的细菌筛选和驯化的方法，为日后系统开发耐受丙酸盐微生物，联合丙酸盐和耐受丙酸盐微生物进行应用提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，解决了现有技术中存在的无抑菌剂和耐受微生物联合应用的问题。

本发明的有益效果是通过筛选驯化得到了一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌GordoniaparaffinivoransZM052，证实了该菌株在丙酸盐中有良好的生长性能；构建了耐受丙酸盐细菌的筛选和驯化方法，并提出联合使用丙酸盐和耐丙酸盐微生物进行应用的方法；观察到该菌株在羧甲基纤维素钠、碱性木质素、萘、菲、蒽、芘为碳源的培养基中均有生长，因而指明该菌株具有应用于饲料发酵，主要是牧草和秸秆的有氧发酵，起到改善饲料营养价值和降解部分污染物的作用。

本发明所采用的技术方案是：取瘤胃液，加入丙酸钠和无机盐培养基于恒温摇床，避光培养，逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养，将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。

进一步，取5ml的瘤胃液于100ml三角瓶中，加入0.1-1％的丙酸钠和40ml的无机盐培养基于恒温摇床120-150rpm，30-39℃下避光培养，2-5天后观察菌种生长情况；逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养1周为1个轮次，完成3-5轮次的培养；将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。

进一步，丙酸钠浓度为0.25％、0.5％、0.75％、1.0％，进行4个轮次的培养，培养条件为恒温摇床150rpm，35℃下避光培养。

进一步，无机盐培养基各种盐浓度为：MnSO₄0.02-0.05mg/L、ZnSO₄0.02-0.05mg/L、(NH₄)₂MoO₄0.02-0.05mg/L、FeCl₃0.1-0.4mg/L、CaCl₂20-50mg/L、MgSO₄50-80mg/L、K₂HPO₄90-120mg/L、Na₂HPO₄100-160mg/L、KH₂PO₄30-50mg/L、NH₄Cl15-50mg/L。

进一步，前期取目标菌在含有0.1-1％的丙酸钠无机盐培养基接种摇瓶培养，逐渐提高丙酸钠浓度到1％；后期使用1-5％的丙酸钠无机盐培养基摇瓶培养，其中按照葡萄糖：丙酸钠为1:20-1:5的比例加入葡萄糖，每个丙酸钠浓度培养周期为1周，逐渐提高丙酸钠的浓度到5％，将最终获得的生长旺盛的菌株进行保种。