[发明专利]弱感光高秆野生稻同源异源多倍体新种质的创制方法

说明书

本发明的弱感光高秆野生稻同源异源多倍体新种质的创制方法，涉及水稻多倍体育种技术领域，其是以弱感光性高秆野生稻新种质的成熟胚为外植体诱导愈伤组织并进行染色体加倍获得同源异源多倍体，该方法切实可行，所获得材料有进一步的利用价值，可为开展水稻多倍体育种提供重要材料来源。

技术领域

本发明涉及水稻多倍体育种技术领域，特别是弱感光性高杆野生稻同源异源多倍体新种质的创制方法。

背景技术

高秆野生稻原产于南美洲热带地区，含有大量栽培稻不具备的抗性等优异基因，是水稻育种的宝贵资源。然而，高秆野生稻的染色体组为CCDD，属异源四倍体，在与AA组栽培稻进行种间杂交的过程中存在严重的生殖隔离，难以直接进行育种利用。

已有研究表明，同源多倍体可以克服杂交不孕性。所以，诱导同源异源多倍体高秆野生稻种质是利用其有利基因的关键。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术中的不足之处而提供弱感光高秆野生稻同源异源多倍体的创制方法，以克服杂交不孕性。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了弱感光高秆野生稻同源异源多倍体新种质的创制方法，

以弱感光性高秆野生稻新种质的成熟胚为外植体诱导愈伤组织并进行染色体加倍获得同源异源多倍体。

优选的，所述弱感光性高秆野生稻新种质的成熟胚的创制方法，包括以下步骤：

（1）利用高剂量γ射线辐射诱变高秆野生稻成熟种子，（2）在辐射2代通过超大群体种植，选择弱感光性突变体，利用该弱感光性突变体连续自交21代，每代选择弱感光和高育性的单株，最终获得弱感光性的高秆野生稻新种质。

优选的，所述方法具体包括如下步骤：

步骤一：以弱感光性高秆野生稻新种质的成熟胚为外植体，进行成熟胚愈伤组织诱导；

步骤二：愈伤组织试分化；

步骤三：愈伤组织秋水仙碱加倍处理；

步骤四：愈伤组织恢复培养与分化；

步骤五：再生芽生根壮苗培养；

步骤六：幼苗炼苗；

步骤七：幼苗移栽；

步骤八：植株形态学观察；

步骤九：根尖染色体计数；

步骤十：倍性分析。

优选的，所述步骤一具体是：将高秆野生稻新种质的成熟种子脱去外壳消毒之后接种在MB+2,4-D 2.5mg/L+6-BA 1.0mg/L +Sucrose 3%+ Phytagel 0.4% 的培养基上，控制温度为25℃，在黑暗条件下诱导愈伤组织产生；

所述步骤二具体是：将诱导产生的胚性愈伤组织接种在MS+KT 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+Sucrose 3%+ Phytagel 0.4% 的培养基上，控制温度在27℃，在光照条件下进行愈伤组织试分化；

优选的，所述步骤三具体是：将愈伤组织置于含200mg/L秋水仙碱的NB+Sucrose 3%+DMSO 1.5% 的液体培养基中，控制温度在25℃，在黑暗条件下在150rpm（每分钟150转）的摇床中摇动培养120小时；

所述步骤四具体是：将处理过的愈伤组织洗去秋水仙碱后晾干表面水分，之后接种到MS+KT 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+Sucrose 3%+Phytagel 0.4% 的培养基上，控制温度为25℃，在黑暗条件下恢复培养48小时，再转到温度为27℃的光照条件下进行分化培养；