[发明专利]一种同时测定玄参中10种核苷类成分的方法

说明书

本发明公开一种同时测定玄参中10种不同核苷类成分的方法，包括1)对照品溶液制备；2)供试品溶液制备；3)实验条件优化与方法学考察；4)样品含量测定。本发明建立了超快速液相色谱‑串联四级杆/线性离子阱质谱(UFLC‑QTRAP‑MS/MS)同时测定玄参中10种核苷类成分的方法，为玄参药材内在质量的综合评价提供了可靠的检测方法。

技术领域

本发明涉及一种同时测定玄参中10种核苷类成分的方法。

背景技术

玄参系玄参科植物玄参的干燥根，具有清热凉血，滋阴降火，解毒散结之功效；目前药材的质量控制研究主要是通过测定其中的哈巴苷、哈巴俄苷的含量作为评价指标，难以实现全面客观地评价玄参的药材质量。

核苷类成分是生物细胞维持生命活动的基本组成元素，参与DNA代谢过程，具有抗病毒、基因治病、免疫调节、改善脑细胞代谢等多种生物活性；有学者认为核苷可能是补益中药的共同物质基础，核苷可作为玄参的药效物质基础，鉴于核苷类免疫调节活性与玄参滋阴功效的相关性，核苷类成分可以作为玄参药材质量评价的一项指标。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种同时测定玄参中10种核苷类成分含量的方法，建立了基于UFLC-QTRAP-MS/MS技术同时测定玄参药材中多种核苷类成分含量的方法，为玄参药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的一种同时测定玄参中10种核苷类成分的方法，包括以下步骤：

1)制备对照品溶液；

2)制备供试品溶液：取玄参粉末1.0g(过80目)，置于25ml具塞锥形瓶中，加入10ml超纯水，室温下超声(500W、40kHz)处理45min，过滤，滤液于12000r/min离心取上清液，过0.45μm微孔滤膜，得供试品溶液；

3)取步骤1)中的对照品溶液，在色谱-质谱条件下测定，以对照品的峰面积对相应的浓度进行线性回归，得回归方程、相关系数和线性范围；

4)取步骤2)中制得供试品溶液，在同样的色谱-质谱条件下，进行线性回归，得回归方程、相关系数和线性范围；将对照品的数据与供试品溶液的数据进行对比分析。

作为改进，所述步骤1)中配制对照品溶液的具体操作为：

称取尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2′-脱氧鸟苷、腺苷、2′-脱氧腺苷对照品适量，加纯水配制成质量浓度分别为213.00、168.00、160.00、1011.00、190.00、156.00、1042.00、66.00、414.00、91.50μg/ml的对照品储备液；取各对照品储备液适量，加水定容至10ml制成混合对照品溶液，并逐级稀释，得到一系列不同浓度的10种核苷混合对照品溶液，以0.45μm微孔滤膜滤过，待用。

作为改进，所述步骤2)中，选择水作溶剂，以超声(500W、40kHz)提取，料液比为1∶10，提取时间为45min。

主要基于试验中对提取溶剂(水、30％甲醇、50％甲醇)、料液比(1∶10、1∶15、1∶20)、提取方法(回流、超声处理)及提取时间(15min、35min、45min、60min)进行了单变量考察，用紫外分光光度法对总核苷含量进行检测。结果表明，水作为最适合的溶剂可以提取出更多待测物；超声提取效果比回流提取好，且方便易行；料液比、提取时间优化后分别为1∶10和45min。

作为改进，所述步骤3)中，当流动相中添加5mmol/L醋酸铵时，化合物的峰型能得到显著改善，优化后的实验色谱-质谱条件具体为：