[发明专利]乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3、培养基及CTC-3的建立方法和应用

说明书

本发明提供了一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3、培养基及CTC‑3的建立方法和应用，涉及细胞技术领域，本发明提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3，其保藏编号为CCTCC NO：C201892。该细胞系性状稳定，可开展大规模基础研究与临床试验，从而进一步把握循环肿瘤细胞的特质、阐释肿瘤发展机制，为癌症患者临床分期、预后判断、个体化治疗提供依据。本发明提供的培养基，包括基础培养基和添加剂。该培养基可大量扩增高质量高纯度的循环肿瘤细胞。本发明提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3的建立方法，操作简单、成本低廉、普适性广，能够快速有效地实现乳腺癌循环肿瘤细胞的扩增培养。

技术领域

本发明涉及细胞技术领域，尤其是涉及一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3、培养基及CTC-3的建立方法和应用。

背景技术

循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell，CTC)是从实体肿瘤脱落而进入外周血液循环的肿瘤细胞，它存在于乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中。循环肿瘤细胞作为表征恶性肿瘤转移潜能的重要生物学标志，在血液中的存在及数量能够反映肿瘤恶性程度、肿瘤治疗的效果及预后。因CTC检测具有微创、实时等特点，被称为“液态活检”。

目前CTC检测的主要方法包括依赖肿瘤相关标志物检测的免疫学检测技术和基于形态学富集的膜过滤技术(Isolating by size of epithelial tumor cells，ISET)。前者是基于细胞表面表达不同抗原标志，将针对肿瘤细胞表面抗原的特异性抗体EpCAM、CK等包被于磁珠表面以完成肿瘤细胞的特异性识别，借助外加磁场筛选富集CTCs。该技术的优势在于特异度较高，已有商品化的半自动检测设备(CellSearch)；但肿瘤特异性抗原表达的缺失会造成假阴性结果。后者是根据细胞大小的差异，利用过滤的方法将体积较大的肿瘤细胞筛选富集。该技术的优势在于方法简单、价格低廉，分离获得的CTCs具有活性可用于后续研究；但由于缺乏形态学诊断金标准，该富集技术特异性相对较差。

因此，开发一种稳定的循环肿瘤细胞系及相应的操作简单的循环肿瘤细胞系的培养方法，用以基础研究和临床试验尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，该细胞系性状稳定，可多次稳定传代，可用于进行基础研究与临床试验。

本发明的第二个目的在于提供一种用于培养上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，该培养基能够有效促进单个循环肿瘤细胞的增殖，可大量扩增高质量高纯度的循环肿瘤细胞。

本发明的第三个目的在于提供上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，以缓解现有技术中存在的富集循环肿瘤细胞易造成假阴性或特异性较差的技术问题。

本发明的第四个目的在于提供上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3在建立循环肿瘤细胞分离培养体系中的应用。

本发明提供了一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，所述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的保藏编号为CCTCC NO：C201892。

本发明还提供了用于培养上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，所述培养基包括基础培养基和添加剂；

所述基础培养基包括体积比为1:0.5-5的DMEM培养基和PRMI1640培养基；

所述添加剂包括1-5mM的L-谷氨酰胺；

优选地，所述培养基还包括胎牛血清；

优选地，所述培养基还包括双抗；

本发明还提供了上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，所述建立方法包括：