[发明专利]一种细胞培养液及人原代肺癌细胞株的建立方法

权利要求书

1.一种细胞培养液,其特征在于在F-12培养基与DMEM培养基混合物中添加胎牛血清和激酶抑制剂Y-27632。

2.根据权利要求1所述的细胞培养液,其特征在于还包括GlμtaMAX、胰岛素、氢化可的松、表皮生长因子和腺嘌呤。

3.根据权利要求2所述的细胞培养液,其特征在于F-12培养基与DMEM培养基按体积配比3：1进行混合生成混合培养基，再添加体积浓度3％～10％的胎牛血清、2mM GlμtaMAX、5μg/mL胰岛素、0.4μg/mL氢化可的松、10ng/mL表皮生长因子、24μg/mL腺嘌呤和2.5～10μmol/L Rho激酶抑制剂Y-27632。

4.一种人原代肺癌细胞株的建立方法，其特征在于将从肺癌患者已经采样的样本组织碎块化为肿瘤碎块，采用1640培养液对肿瘤碎块进行洗涤，将洗涤后的肿瘤碎块重悬于细胞培养液中形成肿瘤碎块悬液，所述细胞培养液为权利要求1至3任意一项所述的细胞培养液，将肿瘤碎块悬液接种到孔板后放置在细胞培养箱中培养2～5天，弃除培养液、未贴壁肿瘤碎块和悬浮细胞，采用含50μg/mLG418的细胞培养液对肿瘤碎块进行5～10天的培养，每2～3天更换一次含50μg/mL G418的细胞培养液，培养到每孔细胞汇聚度不小于90％。

5.根据权利要求4所述的人原代肺癌细胞株的建立方法，其特征在于在扩增培养前增加去除纤维细胞操作，具体为通过胰蛋白酶消化去除成纤维细胞，具体为弃除细胞培养液后，采用不含血清的DMEM培养基洗涤细胞，弃掉洗涤液后，添加预先温热的0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液，将细胞置于细胞培养箱内，静置2分钟，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基终止酶反应，用移液枪轻轻吹洗贴壁细胞，使成纤维细胞脱离细胞培养板；弃上清液，再用含10％胎牛血清的DMEM培养基洗涤细胞一次，弃上清液；重新添加含50μg/mL G418的细胞培养液继续培养肿瘤细胞。

6.根据权利要求4或5所述的人原代肺癌细胞株的建立方法，其特征在于采用1640培养液对肿瘤碎块进行洗涤具体为将碎块化后的样板组织重悬于1640培养液中并置于离心管内进行洗涤。

7.根据权利要求6所述的人原代肺癌细胞株的建立方法，其特征在于孔板的每个孔的细胞培养液的量为300～700μL。