[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其在防治牡丹红斑病中的应用

说明书

本发明公开了一株枯草芽孢杆菌及其在防治牡丹红斑病中的应用。该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株HZ08‑3，是从菏泽湿地河泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14679。试验结果表明：枯草芽孢杆菌菌株HZ08‑3生物防治制剂防治牡丹红斑病效果显著，防治效果达到75.95％，且牡丹长势良好，无药害产生。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域。具体而言，本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其在防治牡丹红斑病中的应用，以及采用该芽孢杆菌制备的生物防治制剂。

背景技术

牡丹为我国传统名花，也是世界著名的花卉之一，自古以来被国人誉为花王、国花等，被世界各国誉为中国花。近年来，随着牡丹栽培面积的迅速扩展、品种增多，牡丹病害的发生危害呈上升趋势，其中牡丹红斑病(Cladosporium paeoniae Pass.)是危害牡丹最严重的病害之一,该病也危害芍药。牡丹红斑病由牡丹枝孢霉(Cladosporium paeoniaePass.)引起，主要危害牡丹的叶和绿色茎，叶片正面及茎上的病斑长期保持暗紫红色是该病的主要症状特点，6月中旬至7月下旬为该病发病盛期。病原菌侵染牡丹后，造成牡丹花色衰退、生长受损和丹皮量少质差，造成花农经济损失惨重，病害的爆发和流行严重制约了我国牡丹产业化的发展。

目前生产上常采用化学药剂防治牡丹红斑病。化学防治极易造成农药残留，污染环境，并且化学农药的长期使用，使得病原菌对其产生抗药性，导致防治效果下降甚至失败。

生物防治是利用物种间的拮抗作用来减少病害的发生，对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性，因而具有化学杀菌剂不具有的优势，正逐步成为代替化学杀菌剂的最佳方式。而获得高效拮抗菌是生物防治的基础。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是最早被报道用来防治植物病害的菌种。

芽孢杆菌是一类好氧或兼性厌氧的产芽孢革兰氏阳性杆菌的总称，其生理特征丰富多样，在自然界中广泛存在，是土壤和植物体表根际的重要微生物种群，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性。芽孢杆菌突出的特征是能产生内生耐热以及对紫外线、电磁辐射及一些化学药品有很强的抗逆性的芽孢，这有利于生防菌剂的生产和剂型加工，也利于其在环境中的存活、定殖与繁殖。由于芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、能够形成抗逆性较强的芽孢，在产品开发中较非芽孢杆菌具有有效活菌数量高、性能稳定等优势而备受瞩目。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于高效防治牡丹红斑病的新的微生物——枯草芽孢杆菌菌株HZ08-3。本发明的枯草芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产量大、抗逆性强，在植物(尤其是牡丹)表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：本发明所提供的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株HZ08-3，是从菏泽湿地河泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCC No.14679。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上菌落形态为圆形或不规则形，乳白偏黄色，表面粗糙起褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。

本发明枯草芽孢杆菌(B.subtilis)菌株HZ08-3的培养方法或繁殖方法包括：

(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.1～7.3；