[发明专利]一种传染性法氏囊病病毒VP2基因阳离子微球疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种传染性法氏囊病病毒VP2基因阳离子微球疫苗及其制备方法。本发明提供了一种微球，由阳离子聚乳酸‑乙醇酸共聚物微球和包覆在其内部的核酸分子组成；所述核酸分子为具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的线性核酸分子或具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的环形核酸分子。本发明提供的微球可制备传染性法氏囊病病毒疫苗。本发明制备方法简单，生产成本低，适于大规模生产。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种传染性法氏囊病病毒VP2基因阳离子微球疫苗及其制备方法。

背景技术

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒引起的一种急性、高度接触性和溶淋巴细胞性传染病。该病毒主要侵染鸡的中枢免疫器官—法氏囊，引起雏鸡法氏囊的B前淋巴细胞变性坏死和不同程度的免疫机能抑制，最终导致鸡群感染其他致病因子并最终死亡，鸡群的发病和死亡严重影响了养禽业的健康发展。

传染性法氏囊病病毒属双节段的RNA病毒科，禽双RNA病毒属。其基因组由A、B两个双链RNA节段组成，其中位于A节段的VP2核苷酸序列编码的VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原，可以诱导宿主产生保护性中和抗体。

预防传染性法氏囊病，一般使用减毒活疫苗或灭活疫苗，减毒活疫苗的效果要优于灭活疫苗。但是减毒活疫苗仍然对雏鸡有一定的毒力，使用上存在散毒的风险。DNA疫苗作为第三次疫苗革命的产物，应用时不受母源抗体干扰，可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫，全面诱导机体的免疫应答反应，且具有免疫原性强，交叉保护性好等特点。然而DNA疫苗在进入机体后容易被体内环境所破坏，导致其不能发挥有效的免疫作用，需要通过相应的保护方法使DNA疫苗在发挥有效作用前不被降解。因此引入可延缓DNA疫苗降解的生物高分子，作为保护DNA疫苗的载体，是一种既安全又有效的策略。

聚乳酸-羟基乙醇酸由两种单体——乳酸和羟基乙醇酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性，无毒副作用。由聚乳酸-羟基乙醇酸制作的微球具有延缓药物释放时间，保护药物完整性和免疫活性的作用，被广泛应用于药物载体的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种传染性法氏囊病病毒VP2基因阳离子微球疫苗及其制备方法。

本发明提供了一种微球，由阳离子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球和包覆在其内部的核酸分子组成；所述核酸分子为具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的线性核酸分子或具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的环形核酸分子。

本发明还保护一种微球的制备方法，包括如下步骤：采用阳离子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球包覆核酸分子，得到微球；所述核酸分子为具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的线性核酸分子或具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的环形核酸分子。

本发明还保护一种微球的制备方法，包括如下步骤：将阳离子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球与核酸分子混合后震荡、离心，收集沉淀，沉淀采用水洗涤后冷冻干燥，得到所述微球；所述核酸分子为具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的线性核酸分子或具有传染性法氏囊病病毒VP2基因的环形核酸分子。

以上任一所述阳离子聚乳酸-乙醇酸共聚物微球是将聚乳酸-乙醇酸共聚物在阳离子表面活性剂的作用下制备得到的微球。

所述阳离子表面活性剂具体可为十六烷基三甲基溴化铵。

所述聚乳酸-乙醇酸共聚物的端基可以为羟基，聚乳酸-乙醇酸共聚物具体可为端羟基聚(外消旋乳酸－乙醇酸)共聚物(特征粘度具体可为0.45-0.55，分子量具体可为60kd，乳酸和乙醇酸的含量比具体可为50：50)。所述端羟基聚(外消旋乳酸－乙醇酸)共聚物具体可为济南岱罡生物工程有限公司，型号：DG-50DLGOH055的产品。