[发明专利]一种检测血液中氯硝西泮含量的液相色谱分析方法

说明书

本发明检测血液中氯硝西泮药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的氯硝西泮药物浓度，该方法具有快速、提取率高、重现性好、专属性好、分离效率高和定量分析准确的优点，可满足抗癫痫药物氯硝西泮血药浓度监测的要求，为临床氯硝西泮的个性化给药提供依据。

技术领域

本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中氯硝西泮药物浓度的方法。

背景技术

氯硝西泮(Clonazepam，CZP)为广谱抗惊厥药，也可用于焦虑性神经症，是一种高阶苯二氮卓类药物。其分子式为C₁₅H₁₀ClN₃O₃，化学结构为1，3-二氢-7-硝基-5-(2-氯苯基)-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2酮，具体结构式如图1所示。氯硝西泮临床应用于治疗神经性疾病，其治疗窗窄，有效血药浓度仅为20-70ng/mL；而且个体间药动学特征差异大，临床主张个性化给药。不良反应以中枢系统症状多见，也可出现行为异常，血药浓度超过100μg/mL时可见发作加频。因此，在临床治疗中，对氯硝西泮进行及时准确的血药浓度监测十分必要。

目前，氯硝西泮的检测方法主要包括薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法。在众多的方法中，液相色谱法为测定氯硝西泮的首选方法。以往方法存在前处理复杂、干扰因素多、分析时间长、灵敏度不高、定性定量不够准确的问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供一种检测血液中氯硝西泮药物浓度的方法，该方法定量准确，成本低，普适性高。

本发明采用的以下技术方案：

本发明的一种检测血液中氯硝西泮药物浓度的方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别和10μL内标工作液及由1∶1的甲醇和水组成的80μL复溶液混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀1-5min后，使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的氯硝西泮和内标色谱图，在上述氯硝西泮和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为氯硝西泮溶液，所述内标工作液为硝西泮溶液；

(a)标准工作液的配制：

精确称取氯硝西泮标准品10mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为25％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有200ng/mL-2000ng/mL氯硝西泮的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(b)内标工作液的配制：

精确称取硝西泮标准品10mg置于10mL容量瓶，用含水量为0％-25％甲醇溶解，并定容于10mL，得到标准储备液B，将标准储备液B用含水量为25％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，得到浓度为650ng/mL的内标工作液，并在-20℃条件下保存；

(二)检测血液的离心