[发明专利]一种用于培养尿液来源细胞的培养基

说明书

本发明公开了一种用于培养尿液来源细胞的培养基，属于细胞培养领域。所述培养基中含有人源血小板裂解物。申请人通过多年来大量地筛查实验，最终确认人源血小板裂解物作为无异源性尿液来源细胞培养基的核心添加物，可克服以往无异源性培养时所存在的尿液来源细胞增殖速度极慢并且逐渐发生细胞死亡等问题。添加人源血小板裂解物的无异源性培养基并能够较好地培养尿液来源细胞，获得研究或临床应用所需的细胞量。本发明血小板裂解物在尿液来源细胞的无异源性培养及培养基中的应用具有创新性，对再生医学具有重大的意义。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种用于培养尿液来源细胞的培养基。

背景技术

近年来随着诱导多能干细胞技术的成熟，多种不同类型细胞均可成功诱导成多能干细胞，包括尿液来源细胞，据文献报道，2011年尿液来源细胞被成功诱导成为多能干细胞。而尿液来源细胞相较于其他类型的细胞提取方法更简单，只需要收集供体的尿液即可，避免对供体造成疼痛或创伤，因此尿液来源细胞是诱导多能干细胞供体的理想来源。由于尿液来源细胞的培养是获得诱导多能干细胞的关键步骤，因此，发展适合临床级别尿液来源细胞的培养技术对再生医学具有极大的推进作用。

1972年Southerland和Bain通过收集新生儿尿液并离心进而弃除上清获得少量细胞沉淀，然后用含30％胎牛血清的培养基将细胞沉淀悬浮，进而进行培养，首次从尿液中收集培养得到尿液来源细胞。之后数十年关于尿液来源细胞培养技术得到了极大的发展，然而这些用于培养尿液来源细胞的培养基都含有胎牛血清或者其它动物源性等异源性成分。除了动物性异源性成分，异源性成分还包括植物源性、微生物源性及真菌源性等非人源物质的成分。培养基中所含有的这些异源性成分存在引入外源病毒的风险，此外，异源性成分也会成为异源抗原从而引起免疫应答，这严重地阻碍了尿液来源细胞在临床细胞治疗、临床再生医学方面等的应用。

尿液来源细胞培养基近年来不断改进，EGF、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺、硒、三碘甲状腺氨酸、视黄酸、氢化可的松、腺嘌呤、B27等在不断被尝试加入尿液来源细胞培养基中来替代动物血清或其他异源物质，但实际情况是当完全缺乏动物血清或其它异源性成分时，在上述添加物存在下极难或不能获得我们所需应用量的尿液来源细胞。研究期间通常会发现在培养过程中尿液来源细胞增殖速度极慢并且逐渐发生细胞死亡，因此要实现完全无异源性尿液来源细胞的培养仍需要经过深入探索和研究。

有实验数据表明，从尿液中收集并成功培养到尿液来源细胞与尿液样本的体积、pH值、渗透压、尿液供体年龄、尿液中的草酸含量、尿液中淀粉酶活性及与尿液在膀胱中存留的时间有相当大的联系。从1L的尿液中仅可收集到0－6300个尿液来源细胞，其中大部分样本可收集到的尿液来源细胞量少于1000个，而可收集到尿液来源细胞并存活下来的尿液样本量仅占所有尿液样本量的37％。上述获得足够尿液来源细胞的样本用于培养时，培养条件均为含20％的胎牛血清的培养基，在不含血清的培养基中无法培养得到尿液来源细胞。即便是利用20％的胎牛血清的培养基进行尿液来源细胞培养时，收集到的大部分细胞呈现球状形态且无法进行贴壁生长，而且贴壁后的细胞大多为呈现纺锤状形态生长的单个细胞，培养一段时间后大部分只可观察到1到2个细胞增殖克隆，并且需要培养接近1个月才可增殖到可传代的细胞数量(R.Belik,W.Follmann,G.H.Degen,P.H.Roos,M.Blaszkewicz,H.J.Knopf,K.Golka,Improvements in culturing exfoliated urothelial cells invitro from human urine,Journal of toxicology and environmental health.Part A,71(2008)923-929.)。