[发明专利]一种定量sST2的Elisa检测试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含有sST2稀释液、洗涤液、检测抗体、显色液、终止液、多个不同浓度的sST2标准品、sST2质控品和微孔反应板，所述微孔反应板包被了sST2单克隆捕获抗体；所述的检测抗体为生物素山羊抗人sST2单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的多个不同浓度的sST2标准品为八个不同浓度的标准品。

3.根据权利要求2所述定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的八个不同浓度sST2标准品的浓度为0pg/ml、62.5pg/ml、125pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml、2000pg/ml、4000pg/ml。

4.根据权利要求3所述的定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的sST2标准品是R&D公司的Human Standard与稀释液配制而成。

5.根据权利要求4所述定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的sST2稀释液为1×稀释液。

6.根据权利要求1所述的定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为0.05％的Tween20加入适量的PBS缓冲液配置而成的TPBS溶液。

7.根据权利要求1所述的定量sST2的Elisa检测试剂盒，其特征在于，所述质控品是搜集临床15例aGVHD阴性样本，收集血清后混合而成的。

8.制备权利要求1所述的sST2的Elisa检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备稀释液:取10×稀释剂浓缩液用超纯无菌水按1:10比例稀释待用；

2)制备定量sST2的Elisa检测试剂盒标准品和质控品：使用稀释液将人致癌抑制因子2标准品稀释得到八个浓度的sST2标准品，同时使用临床aGVHD阴性样本血清混合物作为质控品；

3)制备洗涤液：取适量Tween 20加入磷酸盐缓冲溶液PBS，配制成体积分数为0.05％的TPBS；

4)制备sST2单克隆捕获抗体工作液：取适量Human ST2捕获抗体粉末溶解于适量pH为7.2-7.4的磷酸盐缓冲液中，溶解成120ug/ml的保存液，-20℃保存。再以同样的缓冲液120倍稀释成CAW使用；

5)制备sST2单克隆检测抗体工作液：取适量的Human ST2检测抗体粉末，于1ml的稀释液溶解成2ng/ml的保存液，再进行100倍稀释；

6)制备Stand工作液：取55ng的人致癌抑制因子2标准品溶于0.5ml稀释液配成110ng/ml的保存液；再以40ul的SAS溶于1060ul的稀释液，配置成4000pg/ml的最大浓度工作液，再依次稀释成浓度为2000pg/ml，1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml；

7)制备HRP工作液：取1ml的HRP原液加入39ml的稀释液配置成40×的HRP稀释液，再取上述溶液与稀释液配置成1×的HRP工作液；

8)制备终止液：量取10mL质量分数为18mol/L的浓硫酸沿烧杯壁缓慢注入170ml的蒸馏水中混匀，即按1:18倍稀释；或自选浓度为1mol/L的2N H₂SO₄作为终止液；

9)制备sST2单克隆抗体包被的微孔反应板：取适量Human ST2单克隆捕获抗体，加入磷酸盐缓冲液溶解成终浓度为120ug/ml的CAS保存液，-20℃储存备用；取微孔板，每孔加入50ul稀释后的sST2单克隆捕获抗体工作液CAW，覆膜后置于暗室，在20-22℃放置16-20h，甩去孔内液体，倒扣在吸水纸上拍干；用TPBS清洗2次,甩去孔内液体，用吸水纸拍干；加入150ul稀释液，室温放置1h，甩去板内液体，拍干孔板，加入150ul含2％的蔗糖的PBS溶液SP，室温放置5-10min；甩去板内液体，拍干孔板，倒扣孔板在干净的空间里干燥2h；将孔板放置在铝箔袋中，20-22℃放置过夜次日检测使用，或保存于-20℃保存待用。

9.权利要求1所述的定量sST2的Elisa检测试剂盒用于检测造血干细胞移植术后急性移植物抗宿主病aGVHD。