[发明专利]一种野山参不定根组织培养的方法

说明书

本发明公开了一种野山参不定根组织培养的方法，包括如下步骤：(1)野山参愈伤组织的诱导；(2)野山参愈伤组织的增殖；(3)野山参不定根的诱导；(4)液体培养基中野山参不定根增殖：本发明具有不定根增殖快，皂苷类化合物含量高，工艺过程简单，成本低廉，诱导率高，重复性好，周期短，同时又不受自然环境的影响。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种野山参不定根组织培养方法。

背景技术

野山参，五加科人参属，主要分布中国、北朝鲜、俄罗斯等地区。野山参是自然生长于深山密林15年以上的人参，野山参为滋补强壮药，几乎世人皆知。野山参所含化学成分包括人参皂苷、糖类、氨基酸、维生素、蛋白质、多肽、有机酸、脂溶性成分以及微量元素等，具有特殊的营养补益价值和良好的治疗作用。皂苷是野山参的最为重要的一类生理活性物质，《神农本草经》中记载：人参，补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。久服，轻身延年。人参营养成分与生存环境和生长年限有关，越是在严酷的环境下，生长的年份越长，营养成分含量越高。现代医学证明其具有较高的抗肿瘤活性，调节中枢神经系统、改善心血管及造血系统，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物联合应用有协同作用。近年来，国内外对于人参的需求快速增长。但是，由于长期过度采挖，人参野生资源已基本枯竭，且生长周期长，采集困难，易受气候、病虫害及栽培条件的影响，面临农残超标、老参地等问题，难以满足越来越大的市场需求，严重阻碍我国参业的可持续发展。

人参组织培养技术周期短，不受季节限制，容易进行大规模的工业化生产，具有很大的发展前景。利用发根农杆菌诱导人参产生的发根生长迅速，皂苷种类与田间栽培的人参相同，含量比普通的细胞培养物高，且利用生物反应器大规模培养人参发根的体系也已建立[Jeong GT,Park DH,Hwang B,et al.Comparison of growth characteristics ofPanax ginseng hairy roots in various bioreactors[J].Appl Biochem Biotechnol,2003,107:493]。然而，由于发根诱导过程中外源基因的导入具有潜在的安全性问题，因此该技术没有用于商业化。

也有报道用人参不定根进行组培生产人参皂苷的方法，它具有安全、稳定、易操作等优点，植物组织培养技术可在无土条件下通过离体培养的方式获得大量再生植株，这不仅可节约土地资源，更能大大缩短育种时间，且不受外界环境影响，生长季节限制、不携带病毒等优点，易于进行工业化大规模生产，但目前报道的该方法生产的人参皂苷含量低。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的存在的组培生产人参皂苷含量低的不足，提供一种野山参不定根组织培养的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种野山参不定根组织培养的方法，包括如下步骤：

(1)野山参愈伤组织的诱导：

将野山参根作为外植体，用清水洗净，烘干后，在超净台中用酒精进行消毒，用解剖刀将木质部切割成0.5～1cm的小块，接种到灭菌的第一种固体培养基中，在23±2℃，避光培养4-6周后得到野山参愈伤组织；

(2)野山参愈伤组织的增殖：

将所述野山参愈伤组织接种于灭菌的第一种固体培养基上，在23±2℃，避光培养2～4周；

(3)野山参不定根的诱导：

将步骤(2)获得的组织，接种于灭菌的第二种固体培养基上，在23±2℃，避光培养5～7周后，得固体培养基培养的野山参不定根；

(4)液体培养基中野山参不定根增殖：