[发明专利]一种T淋巴细胞白血病病毒 (HTLV) 抗体化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测T淋巴细胞白血病病毒抗体(HTLV)的化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：偶联有T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗原的磁颗粒、吖啶酯标记的T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗原、T淋巴细胞白血病病毒抗体(HTLV)系列标准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B、清洗液。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。与现有检测T淋巴细胞白血病病毒抗体(HTLV)的技术相比，本试剂盒具有灵敏度高，信噪比高，快速检测的优点。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)和Ⅱ型(HTLV-Ⅱ)是C型逆转录病毒，是一种复杂的逆转录病毒。可引起成人T淋巴细胞白血病（ATL）、热带痉挛性下肢瘫痪／HTLV-Ⅰ相关骨髓病(TSP／HAM）等相关疾病。

HTLV-Ⅰ呈球形，直径约100 nm，中心为病毒的RNA和逆转录酶，最外层系病毒的包膜，其表面嵌有gp120，能与 CD4 结合而介导病毒的感染，属细胞介导传播，游离的病毒颗粒几乎不能感染细胞。体外实验中HTLV-Ⅰ可感染CD4+T淋巴细胞、B细胞、成纤维细胞、上皮细胞和神经胶质细胞等，但在体内主要感染CD4+T淋巴细胞。母乳、精液、血液中存在CD4+T淋巴细胞，所以HTLV-Ⅰ的传播主要通过母乳喂养、性传播、输血、静脉注射毒品共用针头等几条途径，其中母乳传播被认为是HTLV-Ⅰ最主要的传播方式，传播机率在20%以上；性传播是HTLV-Ⅰ自然传播的另一条途径，主要是由男性传给女性；输血传播HTLV-Ⅰ主要是通过血液制品，如全血、红细胞、血小板等。HTLV-Ⅰ感染主要流行于日本南部、加勒比海地区、非洲中部、美洲中部和南部、巴布亚新几内亚和澳大利亚，近年来欧洲和中东一些国家也有关于HTLV-Ⅰ感染的报道；而美国、巴拿马、巴西、意大利、法国和瑞典等几个国家HTLV-Ⅱ感染率较高。

目前，检测T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体的方法有间接免疫荧光法 （IFA）、蛋白印迹试验（WB）、放射免疫沉淀试验（RIPA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和明胶颗粒凝集法（PA）等。其中，放射免疫技术，放射免疫测定法虽然具有高灵敏度、高特异性的优点，但其操作步骤较多，需要特殊的检测设备，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染，使操作人员受到放射性危害；另外，放射性同位素易衰减，有效期短，不易保存。酶联免疫方法，采用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记物，其酶标记物易失活，显色底物见光易分解，灵敏度低，操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要，且其对结构类似的化合物具有一定的交叉反应，造成测试结果不准确。WB检测主要是通过转印技术将病毒标准株的特异性蛋白电泳带转移到特定载体上，再与待检者血清进行反应，从而达到检测血清中HTLV特异性抗体的目的，其存在非特异性反应的问题，而且操作复杂，成本高难以用于筛选试验，通常作为初筛阳性后的确证试验 。

CN 103713127 A（2014.04）公开了一检测T淋巴细胞白血病病毒抗体(HTLV)的ELISA试剂盒，该试剂盒采用辣根过氧化物酶标记T淋巴细胞白血病病毒抗原，采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。而本公司开发的一种T淋巴细胞白血病病毒抗体(HTLV)化学发光试剂盒，采用吖啶酯作为标记物，具有检测稳定、测量快速、灵敏度高的优点。

化学发光方法较其他方法的优点在于检测的简单性。