[发明专利]一种制备提取高分子量透明质酸的方法

说明书

本发明属于透明质酸制备技术领域，公开了一种制备提取高分子量透明质酸的方法，包括以下步骤：步骤1)菌株活化，步骤2)发酵培养，步骤3)醇沉，步骤4)第一次板框过滤，步骤5)第二次板框过滤，步骤6)第三次板框过滤。本发明方法工艺可得到2300‑2600KDa的透明质酸产品，纯度高，技术简便、高效，具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明属于透明质酸制备技术领域，具体涉及一种制备提取高分子量透明质酸的方法。

背景技术

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是普遍存在于脊椎动物和某些细菌荚膜中的一种大分子粘多糖。由于透明质酸具有高度可塑性和粘弹性，良好的生物相容性以及超强的渗透性和保水性，被广泛应用于药物、医学、食品和化妆品等领域。不同分子量的透明质酸具有的生物活性优势不同，低分子透明质酸对皮肤和口服来说，容易吸收，而高分子量透明质酸保水性优于低分子量透明质酸，可用于眼科粘性手术、修复软组织、治疗关节病或作为药物载体等，特别是在减少和预防外科手术后组织粘连中具有很高的应用价值。

目前低分子量透明质酸的制备方法较多，主要有物理、化学和酶等方法，由于高分子量透明质酸较容易降解，提取过程又经常需要酸碱环境，不利于保持透明质酸分子量，所以关于高分子量透明质酸的制备方法目前主要是直接发酵法。

申请人之前的专利技术CN105368912A采用两菌株混合发酵，大大提高了发酵效率，但是该方法对培养条件要求较高，可能导致不能形成优势菌株，而且产生的透明质酸包括小、中、大三种分子量的透明质酸，不能形成纯度较高的单一产品，降低了产品附加值。高分子透明质酸的产生与发酵培养基类型、发酵条件以及菌株细胞通透性等条件的影响。如何制备和提取高分子透明质酸是我们需要解决的技术问题。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种发酵法生产高分子量透明质酸的方法。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种制备、提取高分子量透明质酸的方法，包括以下步骤：步骤1)菌株活化，步骤2)发酵培养，步骤3)醇沉，步骤4)第一次板框过滤，步骤5)第二次板框过滤，步骤6)第三次板框过滤。

具体地，所述方法包括如下步骤：

步骤1)菌株活化：将兽疫链球菌取出，接种于活化培养基进行活化；

步骤2)发酵培养：将活化好的菌种接种于发酵罐中进行发酵培养,发酵培养6h后，往发酵罐中添加甘油，控制甘油的浓度为200-300mg/L；继续发酵培养8-10h，超声处理，然后继续发酵培养2h，终止发酵，得到发酵液；发酵过程中，通过流加浓度为100g/L的蔗糖溶液将残糖浓度控制在不低于30g/L；

步骤3)醇沉：将发酵液过滤去除菌体，得到上清液，向上清液中加入3倍体积的无水乙醇进行沉淀90min，收集沉淀得到湿物料A；

步骤4)第一次板框过滤：往湿物料中加纯水，加热至55℃，溶解后，加入1-1.2‰重量份的中性活性炭和0.8-1％重量份的珍珠岩，并调节pH 6.8，100rpm搅拌3min，再添加8-10‰重量份的NaCl，100rpm搅拌3min，然后51℃保温1h，进行第一次板框过滤，收集湿物料B；

步骤5)第二次板框过滤：往湿物料B加入50℃纯水再次溶解后，再添加1-1.2％重量份的硅藻土，利用氢氧化钠调pH至10，进行第二次板框过滤，收集湿物料C；

步骤6)第三次板框过滤：往湿物料C加入50℃纯水再次溶解，调节pH至7.5，进行第三次板框过滤；将所得湿物料D进行离心烘干，得高分子量透明质酸产品。

优选地，

所述活化培养基的组分为：蔗糖70g/L、蛋白胨2.0g/L以及硫酸镁1.5g/L。

优选地，