[发明专利]一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法

权利要求书

1.一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)污泥样品萃取

对采集的污泥样品进行冷冻干燥处理，以甲醇为萃取剂，使用超声仪超声萃取，将萃取液以甲醇/蒸馏水＝1:20(v/v)进行稀释，离心，收集上清液，重复两次，将所得上清液合并；

(2)上清液净化

将上述上清液经过真空抽滤后采用固相萃取柱(SPE柱)净化富集其中的雌二醇，采用乙酸乙酯将雌二醇从固相萃取柱上洗脱下来，加入内标物，经过氮气吹干、衍生化后得到待测液；

(3)利用气相色谱-串联质谱联用法分析雌二醇含量，得到雌二醇与内标物峰面积之比；

(4)标准曲线的绘制，以内标法进行定量测定

所述的内标法标准曲线绘制：利用分析天平准确称量雌二醇，溶于色谱纯甲醇内，配制成系列浓度的雌二醇标准溶液，均加入内标物，使用步骤(3)气相色谱-串联质谱联用对标准溶液进行分析，以雌二醇浓度为横坐标，雌二醇与内标物峰面积之比为横坐标进行回归并得到标准曲线；

(5)样品及回收率的测定

采集待测厌氧颗粒污泥样品，按步骤(1)对污泥样品进行萃取，再按步骤(2)进行萃取液的净化，最后用步骤(3)的气相色谱-串联质谱联用方法进行样品检测，并与步骤(4)得到的标准曲线进行比较，通过换算最终得到待测污泥样品中雌二醇的含量。

2.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，步骤(3)气相色谱-串联质谱联用仪：Agilent 6890-5973气相色谱-串联质谱联用系统；

色谱柱：Agilent HP-5MS色谱柱；

气相色谱柱箱温度升温程序：100℃保持1min，然后以10℃/min升至200℃，再以3℃/min升至300℃，最后在300℃保持10min；

质谱条件：接口温度为280℃，离子源温度为230℃。

3.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，步骤(3)待测液和步骤(4)标准液中内标物的浓度相同。

4.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，超声萃取波频为20kHz，超声时间为15min。

5.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，内标物为雌二醇的同位素化合物氘代雌二醇。

6.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，固相萃取柱在使用前先依次用乙酸乙酯、甲醇、超纯水过柱进行活化。

7.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，上清液通过固相萃取柱后，采用50％甲醇水溶液淋洗萃取柱以洗去杂质，之后再采用乙酸乙酯溶出萃取柱中的雌二醇。

8.按照权利要求1所述的一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法，其特征在于，衍生化方法为：将加入内标物的洗脱液用氮气吹干后，加入衍生化试剂Bstfa、吡啶，在温度70℃衍生化30min，每2-5g步骤(1)的污泥样品得到的洗脱液对应100μl衍生化试剂Bstfa、50μl吡啶。