[发明专利]一种测定糖类抗原50含量的试剂盒及其测试方法

说明书

本发明公开了一种采用磁微粒化学发光法测定人血清中糖类抗原50(CA50)含量的试剂盒。试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的糖类抗原50包被抗体和碱性磷酸酶标记的糖类抗原50标记抗体；磁微粒试剂为磁微粒与羊抗FITC连接物。本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于40min,明显快于同类试剂盒；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现糖类抗原50的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，具体涉及一种采用磁微粒化学发光法测定人体中糖类抗原50(CA50)含量的试剂盒。

背景技术

CA50作为新兴生物学标记物，具有生物变异性低、稳定性高、不受性别、年龄、种族、肾功能干扰等特点，在心衰患者的诊断、治疗及风险预测中发挥着重要作用，血清中的CA50水平与心衰的严重程度呈正相关，不受年龄、体重等指标的影响，在心血管疾病中发挥着阻断IL-33的抗心肌细胞肥大、抗心肌纤维化、抗动脉粥样硬化作用。此外在急性冠脉综合症发生发展中也可能发挥着重要作用，作为反映冠脉易损斑块稳定程度的炎症标志物以及心血管疾病不良预后的有效生物学标志物。还可作为潜在的代表心脏机械超负荷的有效生物学标志物，且独立于其他临床预测因子。

目前已知的糖类抗原50测定方法酶联免疫吸附法(ELISA)。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种准确度高的采用磁微粒化学发光法测定人血清中糖类抗原50(CA50)含量的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种测定糖类抗原50含量的试剂盒，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；

所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；

分别配制校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；将糖类抗原50校准品、糖类抗原50质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物，独立地置于包装容器内，得到糖类抗原50的定量测定试剂盒；

(一)、所述校准品、质控品的配制，包括以下步骤：

用校准品缓冲溶液溶解糖类抗原50，配制抗试剂的校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲溶液是通过在1L的新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；

(二)、所述抗试剂的配制：

1)抗试剂缓冲液的制备：

将10g～20g的Na₂PO₃H·12H₂O、1～2g的NaPO₃H₂·12H₂O、1g～5g的绵羊血清、3g～10g的新生牛血清、1g～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用4M HCl调节pH至5～6，制得所述抗试剂缓冲液；

2)异硫氰酸荧光素与糖类抗原50抗体偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的糖类抗原50包被抗体：