[发明专利]一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法

说明书

本发明涉及一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法。本方法建立在对布鲁氏菌IgG和IgM抗体亚型检测方法的基础上，构建易感动物模型，获得我国常用布鲁氏菌弱毒疫苗(猪种S2株和牛种A19株)疫苗免疫及标准强毒株(牛种2308株)作为自然感染的抗体消长规律。并根据自然感染组与疫苗免疫组的特点，确定5种状态，建立了区分自然感染与疫苗免疫的方法；并对本方法进行验证，确认其可靠性。本法只需对一个样本同时检测其IgG和IgM就可对自然感染和疫苗免疫进行区分，方法简单方便、准确性高、操作时间短和价格低廉，适用于各类实验室操作，满足规模检测的要求，本方法填补了国内外在此领域的技术空白，为布病防控提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法——属生物制品检测技术领域。

技术背景

布鲁氏菌病作为重要人畜共患病之一，严重威胁公共安全和养殖业健康发展。对于家畜来说，布病的主要症状有波状热、体重降低、消瘦、产奶性能下降，对于怀孕母畜则引起流产、死胎、久配不孕等症状，给国际贸易带来严重威胁，也影响相关动物制品的出口，被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病，我国也将其列为二类传染病之一。除少数发达国家外，布病在世界170多个国家均有发生，其中以中亚、中东等流行情况最为严重。

我国布病曾在上世纪60～80年代得到有效控制，但近年来，动物布病的发病数量和群体发病率却呈现逐年升高的趋势。作为一种严重影响公共卫生安全和养殖业健康发展的人畜共患病，预防和控制布病显得迫在眉睫。布病已被纳入《国家中长期动物疫病防治规划(2012～2020年)》。在消灭布病的国家或地区，通常采取疫苗免疫和检疫扑杀相结合的措施以达到净化群体的目的。

疫苗免疫是在动物上最为有效控制和预防布病的措施之一。牛种布鲁氏菌S19株和猪种布鲁氏菌S2株对于我国布病的防控起到了重要作用，尤其是S2株，其有我国在上世纪60年代开发，对各种布病易感动物均具有良好的保护效果，且毒力较低，免疫后产生的副反应和对公共卫生的安全威胁较低。但是上述两种疫苗均为光滑型菌株，其产生的抗体与自然感染难以区分，给疫苗的使用带来了极大困扰。

发明内容

本发明的目的在于建立了一种能够区分动物牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染的技术方法，本发明通过前期建立的针对牛布鲁氏菌IgG和IgM亚型抗体的间接ELISA方法(CN05067812A和CN06771182A)，分别对皮下接种免疫牛布鲁氏菌活疫苗(A19株)、口服免疫牛布鲁氏菌活疫苗(S2株)，以及注射牛布鲁氏菌2308株强毒活菌人工()感染的成年牛血液中的IgG和IgM亚型进行持续追踪其消长规律，确定不同状态(免疫/感染)临界值，以建立牛布鲁氏菌免疫/自然感染的抗体亚型消长模型，并通过抗体亚型对布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染进行鉴别诊断提供技术方法，满足我国布病流行病学调查的需要。

本发明的技术方案

1.本发明所述一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，在于通过分析牛体内针对布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平，确定被检测牛的感染/免疫状态，实现对牛布鲁氏菌疫苗免疫或自然感染的区分，满足布鲁氏菌病(布病)流行病学调查，本方法为非疾病诊断性的。

2.本发明所述一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，还在于布鲁氏菌特异性IgG和IgM亚型抗体水平的检测，是基于特定的牛布鲁氏菌IgG抗体检测试剂盒和牛布鲁氏菌IgM抗体检测试剂盒进行的。

3.本发明所述的一种区分牛布鲁氏菌疫苗免疫与自然感染状态的方法，还在于确定被检测牛的感染/免疫状态是通过构建布鲁氏菌疫苗免疫和模拟布鲁氏菌自然感染的牛体内IgG和IgM消长规律，并划分判定范围来实现的，即判断被检动物的感染/免疫状态的指标定为：

当血清样本的P％值≥20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阳性，当血清样本的P％值＜20％时，为牛布鲁氏菌IgG亚型抗体阴性；